감별 백혈구 수 및 Covid-19 진단

소개. 2020년 6월 3일 이탈리아 정부는 업무 및 사회 활동 재개를 포함하는 소위 "2단계"를 시작했습니다. 이 프레임워크에서 무의식적으로 SARS-CoV-2 감염을 전파하고 공중 보건에 위협을 가할 수 있는 무증상 개인을 식별하는 방법에 대한 문제가 전 세계적으로 제기되었습니다. 몬디알 인구는 현재 감염 확산과 새로운 사례 발생의 급격한 증가와 함께 팬데믹 3단계를 경험하고 있습니다. 이제 업무에 복귀하는 사람들의 건강과 안전을 보장하고 상업 및 회의 공간에서 안전 프로토콜을 만드는 것이 시급합니다. 즉, 감염된 사람들이 새로운 전염병 발생을 방지하는 것을 의미합니다. 이를 위해서는 몇 가지 요구를 충족시키기 위해 잘 확립된 대량 선별 프로그램이 필요합니다. 첫째, 몇 분 안에 결과를 제공해야 하고, 영토에 쉽게 전달되어야 하며, 비의료 의료 전문가가 간단하게 수행해야 합니다. 또한 비침습적이고 반복 가능하며 신뢰할 수 있어야 합니다.

현재까지 SARS-CoV-2 감염 진단은 비인두 면봉 또는 기타 호흡기 샘플을 통해 수집된 샘플에서 바이러스 RNA를 식별하여 이루어집니다. 그러나 이 기술은 대량 스크리닝에 적용하기에는 몇 가지 한계가 있으며, 그 중 가장 중요한 것은 진단에 필요한 시간, 검체를 분석하기 위해 지정된 센터의 밀집, 무시할 수 없는 바이러스 전파 위험입니다. 의료 종사자들에게.

처리 시간이 빠른 현장 진단 검사는 환자 관리 및 감염 통제 결정을 신속하게 내려야 하는 환경에서 보다 효과적인 분류를 가능하게 합니다.

최근 바이러스 병원체를 식별하는 백혈구 유형 비율의 특징적인 세트를 갖는 백혈구 수치의 초기 상승을 감지하여 중증 Sar-COV-2 감염 및 그로 인한 COVID-19의 발생을 무죄로 판정하는 새로운 방법이 개발되었습니다. 그리고 그것을 다른 많은 사람들과 구별하십시오. 이 테스트는 실시간 정량 PCR(RT-qPCR)보다 최대 14일 빠른 민감도를 가진 전체 혈구 수 결과에서 양성을 예측할 수 있으며, RT-qPCR 및 항체와 같은 다른 테스트보다 최소 10배 낮은 비용으로 가능합니다. 테스트.

연구의 목표. 진단 정확도 연구의 주요 목표는 대량 진단에 대한 예비 접근 방식으로 증상이 있는 사람과 무증상인 사람 모두에서 SARS-CoV-2 감염을 감지하기 위해 현장 특성 차등 백혈구 계수(CLDC) 장치 및 알고리즘의 사용을 검증하는 것입니다. 심사 프로그램. 비교는 알고리즘 검증을 위한 COVID-19 진단의 황금 표준인 비인두 면봉 분자 테스트와 장치 검증을 위한 Coulter HMX, Beckman Coulter의 혈액 세포 측정 분석으로 대표됩니다.

두 번째 목표는 CLCD 방법이 면봉 분자 검사와 비교하여 더 일찍 SARS-CoV-2 감염을 감지할 수 있는지 정의하고 모든 이중 양성 환자에 대한 접촉 추적 연구를 수행하여 감염 곡선을 결정하기 위해 원래 감염 날짜를 추정하는 것입니다. 초기 감염에 대한 민감도를 테스트합니다.

행동 양식. SARS-CoV-2 감염 진단을 위해 비인두 면봉 채취 절차를 거치는 피험자는 이탈리아 포질리의 IRCCS Neuromed 클리닉 실험실과 이탈리아 Avellino의 Diagnostica Medica Spa에서 순차적으로 모집됩니다. Sar-Cov-2 감염 위험이 낮거나 높은 대상자: 의료 종사자, COVID-19 또는 기타 전염병 이외의 이유로 선택적으로 입원해야 하는 환자, 감염된 환자와 직접 접촉한 사람.

아침에 비인두 면봉 채취 절차와 동시에 모집된 각 피험자는 CLDC 장치 및 알고리즘(CLCD 2)을 사용하여 테스트됩니다. 자발적으로 피험자는 Coulter HMX, Beckman Coulter의 혈액 세포 측정 분석을 위해 채혈(3ml)을 받고 CLDC 알고리즘(CLCD 1)만 사용하여 테스트합니다.

결과 평가자는 rRT-PCR 분석 결과가 나오기까지 최소 6시간이 필요하기 때문에 눈이 멀었습니다. 연구원은 COVID 19 증상 및 위험 요인과 접촉자 추적(일, 모드)에 대한 설문지를 관리합니다. CLDC 테스트에서 양성 반응을 보였지만 면봉 검사에서 음성인 피험자는 2일, 5일, 가능하면 8일 후에 자발적으로 새로운 면봉 검사를 받게 됩니다. 여전히 부정적인 경우 일.

독립적인 맹검 임상의는 실시간 역전사(rRT)-PCR을 통해 국제 지침에 따라 비인두 면봉을 분석합니다.

장치 유효성 검사를 위해 전체 혈구 수(FBC)는 빠른 분석을 위해 전체 혈구 수를 측정하고 결과를 Medichain CLDC-1 포털에 입력하여 스마트폰에 연결된 현장 진료 장치를 통해 분석됩니다. Medichain CLDC-2 스마트폰 현미경 - Adstock 테스트).

표준 스마트폰에 끼우는 장치인 Medichain CLDC-2 스마트폰 현미경은 위상차 모드로 조명된 현미경 슬라이드(버전 2 - Adstock 테스트)에 도말된 약 1µl의 혈액 방울을 분석하는 데 사용됩니다. 그런 다음 이미지는 영국의 서버에서 분석하고 수동 교차 확인을 위해 장치에서 Medichain으로 전송됩니다.

그런 다음 입력 특정 FBC 매개변수를 측정할 수 있는 준비 알고리즘 Athena S3ER가 이 결과에서 데이터를 분석하고 출력을 반환합니다. 감염이 시작될 때 특정 FBC 매개 변수의 수에서 비정상적인 발생을 고려합니다. 이 연구의 기본 테스트 포털(S3ER 알고리즘으로 알려짐)은 http://cldc.medichain.online에 있습니다. 선호하는 확장 포털은 http://cldc.medichain.online/research의 연구 포털입니다. 비인두 면봉 분석. 샘플은 90°C에서 1분 동안 바이러스 열 불활성화됩니다. 비인두 면봉에서 RNA 추출은 Abbott mSample Preparation System(Promega Corporation) 및 자동 추출 시스템(Extraction m2000SP, Abbott Molecular)으로 수행됩니다. 추출된 RNA는 SARS-CoV-2 RdRp, E 및 N 유전자를 표적으로 하는 원스텝 rRT-PCR 시스템인 GeneFinderTM COVID19 Plus RealAmp PCR 키트(ELITechGroup)로 증폭됩니다. 모집된 모든 피험자는 비인두 면봉 검사를 받게 되므로 부분 검증 편향이 없을 것입니다. CLDC 테스트와 비인두 면봉 채취 절차는 질병 진행 편향을 피하기 위해 동시에 수행됩니다. CLCD 테스트와 독립적인 맹검 임상의가 분석한 비인두 면봉이므로 면봉의 속도 PCR 결과를 해석할 때 정보 편향을 피할 수 있습니다. 지수 테스트는 참조 테스트와 완전히 독립적이므로 통합 편향을 피할 수 있습니다. 결정적이지 않은 결과가 기록됩니다.

샘플 크기 및 통계 분석. COVID-19에 대한 양성 발생률은 현재 일반 인구에서 15%, 고위험군에서 20%로 추정됩니다. 따라서 서로 다른 감염 위험이 있는 1000명의 개체군에서 150~200개의 양성을 발견할 것으로 추정됩니다.

양성 비인두 면봉 표본의 유병률이 15%인 1000개의 표본 크기는 95% 신뢰 구간 및 0.8의 검정력에 대해 0.15의 정밀도로 약 0.75의 민감도를 추정하기에 충분합니다.

적격 참가자의 인구통계학적 및 임상적 특징은 각각 연속 및 불연속 변수에 대해 평균 및 표준 비율 또는 절대 및 상대 빈도를 사용하여 요약됩니다. 설명 목적으로만 동일한 통계 분석이 양성 및 음성 비인두 면봉 표본 피험자에서도 보고됩니다. 절차를 반복할 수 없는 테스트의 기술적 실패의 경우 참가자는 추가 분석에서 제외됩니다. 다른 피험자에서는 비인두 면봉(참조 테스트 1) 또는 FBC(참조 테스트 2)와 비교할 때 CLDC(지수 테스트)에 대한 민감도 및 특이도를 추정하고 95% 신뢰 구간을 다음으로부터 계산합니다. 정확한 이항 분포. 이러한 분석은 주요 주제 특성에 따라 복제됩니다. 참가자는 양성 CLDC-PCR, CLDC-FBC 결과의 유병률 측면에서 참양성(TP), 거짓양성(FP), 거짓음성(FN) 및 참음성(TN)으로 특징지을 것입니다. TP, FP, FN 및 TN에 걸쳐 차이가 없는 null 연관은 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 테스트합니다.