ADHDにおけるエピジェネティクス

1 年目: ADHD の miRNA 診断パネルを開発するために、100 人の ADHD 患者と 100 人の健康な対照被験者 (トレーニング セット) を募集します。

1. 台湾の高雄長庚記念病院の小児精神科外来で治療を受けている 100 人の適格な ADHD 患者が、この研究のために募集されます。 年齢と性別が一致した 100 人の対照被験者が、患者と同じ集水域で見つかります。 両親または保護者からインフォームド コンセントを得た後、研究精神科医は K-SADS-E を使用して参加者にインタビューし、診断を確認します。 参加者は、知的障害を除外するために WISC-IV 評価も受けます。

2. ADHD 患者と健康な対照被験者の両方について、経験豊富な児童心理学者が、一貫性のない試験条件を減らすように設計された部屋で Conners CPT および Conners CATA 試験を実施します。 親または保護者は、SNAP-IV 親フォームと SAICA に記入する必要があります。患者の教師は、SNAP-IV 教師フォームに記入する必要があります。 ADHD-RS と CGI は、児童精神科医によってそれぞれ完成され、評価されます。

3. 各参加者から EDTA 抗凝固剤チューブに静脈血を採取します。 血液サンプルは、mirVana miRNA 分離キット (Life technology) でさらに処理され、total RNA が抽出されます。 予備調査結果に基づいて、100 個の ADHD サンプルと 100 個のコントロール サンプルについて、22 個の候補 miRNA の ΔCt 値が決定されます。 次に、最小の p 値を持つ 10 個の miRNA が選択され、2 年目に ADHD の miRNA 診断パネルが作成されます。

4. ADHD 患者と健常対照者は、12 か月の追跡調査を受けます。 ADHD 患者に対するその期間の治療手順は、患者の精神科医の伝統的な慣行と、患者とその両親の同意によって決定されます。

1. 治療を受けることを決定した ADHD 患者は、経口短時間作用型 MPH (MPH-IR) を 1 日 2 ～ 3 回処方され、各用量は 0.3 ～ 1.0 mg/kg の範囲であり、臨床症状の重症度に基づいて決定されます。症状、年齢、身長、体重。
2. ADHDの症状を適切に改善するために、2週間ごとに用量を調整します。 長時間作用型 MPH (リタリン LA) または徐放性メチルフェニデート (コンサータ) への変更は、臨床的要件に応じて許可されます。 MPH-IR と Ritalin-LA の 1 日あたりの最大用量は 60 mg で、Concerta の 54 mg は台湾で承認されている 1 日あたりの最大用量です。 臨床的に耐えられない有害な状態が発生した場合は、用量を減らします。 許容可能な応答を伴うMPHの最終滴定用量は、フォローアップ期間を通じて維持されます。
3. 併用薬は禁止されています。 投薬計画の順守は、患者の両親からの報告と処方箋の残量に基づいて、各来院時に確認されます。 研究の異なる時点の間に新しい投薬を開始した患者は、ドロップアウトと見なされます。
4. 治療を受けないことを決定したADHD患者は、通常、月に1回、外来部門の小児精神科医によって再評価され、研究期間中、行動療法または再教育的心理療法を受ける場合があります。
5. 健康な対照被験者は、ベースラインで一度だけ評価されます。 5. ADHD の患者は、ベースラインから 12 か月後に再評価されます。 ベースラインで投与された miRNA 分析や ADHD 対策などの評価手順が複製されます。

2 年目: SVM 分類モデルを開発し、50 人の ADHD 患者と 50 人の健康な対照被験者を含む独立した検証グループを登録する (テスト セット)

1. すでに収集されたサンプルに基づいて、ADHD グループとコントロール グループの間で最も差次的に発現する 10 個の miRNA を決定できます。 これらの 10 個の値を使用して、SVM 分類モデルを導出し、ADHD の信頼できる強力な miRNA 診断パネルを作成できます。 受信者動作特性 (ROC) 曲線を適用して、この miRNA 診断パネルの有効性を評価します。 このパネルの特異性と感度の両方が 80% に達すると予想されます。
2. 独立した検証グループ (テスト セット) については、ADHD の 50 人の適格な患者と、年齢と性別が一致した 50 人の健康な対照被験者が募集されます。 研究精神科医は、K-SADS-Eを使用して参加者にインタビューして診断を確認し、参加者は知的障害を除外するためにWISC-IV評価も受けます。
3. すべての ADHD 患者と健康な対照被験者は、経験豊富な児童心理学者が Conners の CPT および Conners の CATA テストを実施します。 参加者の親または保護者は、SNAP-IV 親フォームと SAICA に記入する必要があります。患者の教師は、SNAP-IV 教師フォームに記入する必要があります。 ADHD-RS と CGI は、児童精神科医によってそれぞれ完成され、評価されます。
4. EDTA抗凝固チューブを使用して、各参加者から静脈血を採取します。 血液サンプルは、mirVana miRNA 分離キット (Life technology) でさらに処理され、total RNA が抽出されます。 SVM 分類モデルに選出された 10 個の miRNA のレベルは、qRT-PCR によって決定されます。
5. トレーニング セットの結果を検証するために、テスト セットの miRNA データ (50 人の ADHD 患者と 50 人の健康な対照被験者の両方) が、miRNA 診断パネルによるブラインド テストに使用されます。 識別の有効性は、感度と特異性の両方が 80% に達することを期待しています。
6. ADHD患者の治療とフォローアップ手順は、初年度と同じです。 初年度に募集された100人のADHD患者が追跡され、再評価されます

3 年目: ADHD 患者の 12 か月の追跡調査の完了、および標的遺伝子の分析と miRNA の濃縮経路の実行

1. 3年目以降の新規募集はありません。 ADHD 患者 150 人全員の 12 か月間の追跡調査は、今年中に完了する予定です。
2. ADHD患者の2回目の評価は、この研究を終了するために実施されます（ベースラインから12か月後）。 ベースラインで実施されたのと同じ評価手順が繰り返されます。

(1) 血液サンプルを採取し、再度処理して miRNA を抽出します。 (2) 研究精神科医は、K-SADS-E を使用して ADHD 患者にインタビューを行い、患者がまだ ADHD の診断基準を満たしていることを確認します。

(3) ADHD の患者は、神経心理学的検査 (WISC-IV、Conners CPT および Conners CATA) を受け、ベースラインで同じ評価者によって行動症状 (SNAP-IV、SAICA、ADHD-RS および CGI) が評価されます。 投薬に起因する偏見を避けるために、ADHD 患者は神経心理学的評価の日に投薬を受けないように指示されます。

3. 12 か月のフォローアップ中の miRNA レベルの傾向が特定されます。 MPH治療を受けた患者と受けていない患者の間、および継続している患者とADHD診断から寛解した患者の間のmiRNAレベルの差が評価されます。 miRNA が治療後の ADHD 状態を描写するバイオマーカーとして機能できるかどうかが決定されます。

4. TargetScan v6.2、miRWalk、および DIANA-microT を使用して、予測される標的遺伝子と、発現差のある miRNA の濃縮経路を取得します。 検索は、ターゲット miRNA の 3'-UTR 領域のみに焦点を当て、p 値が 0.05 で、最小 miRNA シード長が 7 のソフトウェアで設定されたランダム マッチの確率分布を定義します。