Epigenetik i ADHD

År 1: Rekruttering af 100 ADHD-patienter og 100 raske kontrolpersoner (træningssæt) til at udvikle et miRNA-diagnosepanel for ADHD

1. Et hundrede kvalificerede ADHD-patienter, der behandles i den ambulante afdeling for børnepsykiatri på Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital i Taiwan, vil blive rekrutteret til denne undersøgelse. Hundrede alders- og kønsmatchede kontrolpersoner vil blive fundet i samme opland som patienternes. Efter at have indhentet informeret samtykke fra deres forældre eller værger, skal forskningspsykiatere interviewe deltagerne ved hjælp af K-SADS-E for at bekræfte diagnosen. Deltagerne vil også gennemgå WISC-IV-vurdering for at udelukke intellektuelle handicap.

2. For både ADHD-patienterne og de raske kontrolpersoner vil erfarne børnepsykologer administrere Conners CPT- og Conners CATA-test i et rum designet til at reducere inkonsistente testbetingelser. Forældre eller værger skal udfylde SNAP-IV forældreformularen og SAICA; patienternes lærere skal udfylde SNAP-IV-lærerformularen; og ADHD-RS og CGI vil blive udfyldt og bedømt af henholdsvis en børnepsykiater.

3. Venøst ​​blod vil blive opsamlet fra hver deltager i et EDTA antikoagulantglas. Blodprøverne vil blive behandlet yderligere med mirVana miRNA-isoleringskit (Life-teknologi) for at ekstrahere totale RNA'er. Baseret på de foreløbige resultater vil ΔCt-værdierne af de 22 kandidat-miRNA'er blive bestemt for de 100 ADHD-prøver og 100 kontrolprøver. Derefter vil de 10 miRNA'er med den mindste p-værdi blive udvalgt til at udvikle et miRNAs diagnosepanel for ADHD i det andet år.

4. ADHD-patienterne og raske kontrolpersoner vil have 12 måneders opfølgning. Behandlingsprocedurerne i den tid for patienter med ADHD vil blive fastlagt af patienternes psykiateres traditionelle praksis og aftale mellem patienter og deres forældre.

1. ADHD-patienter, der beslutter sig for at modtage medicinsk behandling, vil blive ordineret oralt korttidsvirkende MPH (MPH-IR) to eller tre gange dagligt, med hver dosis på mellem 0,3 og 1,0 mg/kg, som skal bestemmes ud fra sværhedsgraden af ​​deres kliniske symptomer, samt deres alder, højde og kropsvægt.
2. Dosis vil blive justeret hver anden uge for korrekt at forbedre ADHD-symptomer. Ændringer til langtidsvirkende MPH (Ritalin-LA) eller methylphenidat med forlænget frigivelse (Concerta) er tilladt afhængigt af kliniske krav. De maksimale doser af MPH-IR og Ritalin-LA per dag er 60 mg og af Concerta er 54 mg, da disse er de maksimale daglige doser godkendt i Taiwan. Dosis vil blive reduceret, hvis der opstår klinisk utålelige uønskede tilstande. Den endelige titreringsdosis af MPH med et acceptabelt respons vil blive opretholdt gennem opfølgningsperioden.
3. Samtidig medicin er forbudt. Overholdelse af lægemiddelregimet vil blive verificeret ved hvert besøg baseret på rapporter fra patienternes forældre og hvor meget af recepten der er tilbage. Patienter, der starter på en ny medicin mellem de forskellige tidspunkter i undersøgelsen, vil blive betragtet som frafald.
4. De ADHD-patienter, der beslutter sig for ikke at modtage medicinsk behandling, bliver normalt revurderet af en børnepsykiater i ambulatoriet én gang om måneden og kan modtage adfærdsterapi eller genopdragende psykoterapi i hele undersøgelsens varighed.
5. De raske kontrolpersoner vil kun blive vurderet én gang, ved baseline. 5. Patienter med ADHD vil blive revurderet den tolvte måned efter baseline. Vurderingsprocedurerne, herunder miRNA-analyse og ADHD-foranstaltninger, der blev administreret ved baseline, vil blive replikeret.

År 2: Udvikling af en SVM-klassifikationsmodel og tilmelding af en uafhængig valideringsgruppe med 50 ADHD-patienter og 50 raske kontrolpersoner (testsæt)

1. Baseret på de allerede indsamlede prøver kan de 10 mest differentielt udtrykte miRNA'er mellem ADHD-gruppen og kontrolgruppen bestemmes. Disse 10 værdier kan bruges til at udlede SVM-klassifikationsmodellen og skabe et pålideligt og stærkt miRNA-diagnosepanel for ADHD. Receiver operation characteristic (ROC) kurver vil blive anvendt til at evaluere gyldigheden af ​​dette miRNA diagnose panel. Både specificiteten og sensitiviteten af ​​dette panel forventes at nå 80 %.
2. Til den uafhængige valideringsgruppe (testsæt) vil 50 kvalificerede patienter med ADHD og 50 alders- og kønsmatchede raske kontrolpersoner blive rekrutteret. Forskningspsykiatere vil interviewe deltagerne ved hjælp af K-SADS-E for at bekræfte diagnosen, og deltagerne vil også gennemgå WISC-IV-vurdering for at udelukke intellektuelle handicap.
3. Alle ADHD-patienter og raske kontrolpersoner vil have erfarne børnepsykologer, der administrerer Conners' CPT og Conners' CATA-test. Deltagernes forældre eller værger skal udfylde SNAP-IV forældreformularen og SAICA; patientens lærere skal udfylde SNAP-IV-lærerformularen; og ADHD-RS og CGI vil blive udfyldt og bedømt af henholdsvis en børnepsykiater.
4. Venøst ​​blod vil blive indsamlet fra hver deltager ved hjælp af et EDTA antikoagulantrør. Blodprøverne vil blive behandlet yderligere med mirVana miRNA-isoleringskit (Life-teknologi) for at ekstrahere totale RNA'er. Niveauerne af de 10 miRNA'er, der er valgt til SVM-klassificeringsmodellen, vil blive bestemt ved qRT-PCR.
5. For at verificere resultaterne af træningssættet vil miRNA-data fra testsættet (både de 50 ADHD-patienter og de 50 raske kontrolpersoner) blive brugt til blindtest af miRNA-diagnosepanelet. Diskriminationsvaliditeten forventer, at både sensitiviteten og specificiteten når op på 80 %.
6. Behandlings- og opfølgningsproceduren for ADHD-patienter vil være den samme som i det første år. De 100 ADHD-patienter, der blev rekrutteret i det første år, vil blive fulgt og revurderet

År 3: Afslutning af 12-måneders opfølgning af ADHD-patienter og udførelse af analyse af målgener og berigelsesveje for miRNA'erne

1. Der vil ikke blive rekrutteret nye deltagere i det tredje år. Den 12-måneders opfølgning af alle 150 patienter med ADHD vil blive afsluttet i løbet af dette år.
2. Den anden vurdering af patienter med ADHD vil blive udført for at afslutte denne undersøgelse (tolvte måned efter baseline). De samme vurderingsprocedurer, som blev administreret ved baseline, vil blive gentaget.

(1) Blodprøver vil blive indsamlet og behandlet igen for at udtrække miRNA-. (2) En forskningspsykiater vil interviewe ADHD-patienterne ved hjælp af K-SADS-E for at bekræfte, at patienterne stadig opfylder de diagnostiske kriterier for ADHD.

(3) Patienter med ADHD vil gennemgå neuropsykologisk test (WISC-IV, Conners CPT og Conners CATA) og få deres adfærdssymptomer bedømt (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS og CGI) af den samme bedømmer ved baseline. For at undgå enhver bias afledt af medicin, vil ADHD-patienter blive bedt om ikke at tage deres medicin på dagen for den neuropsykologiske vurdering.

3. Tendenserne for miRNA-niveauerne under den 12-måneders opfølgning vil blive identificeret. De differentielle miRNA-niveauer mellem patienter med versus uden MPH-behandling og mellem patienter, der fortsætter versus dem, der remitterer fra ADHD-diagnosen, vil blive evalueret. Hvorvidt miRNA'er kan fungere som en biomarkør, der skildrer ADHD-tilstanden efter behandling, vil blive afgjort.

4. De forudsagte målgener og deres berigelsesveje for de differentielt udtrykte miRNA'er vil blive opnået ved hjælp af TargetScan v6.2, miRWalk og DIANA-microT. Søgningen vil udelukkende fokusere på 3'-UTR-regionerne af target miRNA'erne med en p-værdi på 0,05, der definerer sandsynlighedsfordelingen af ​​tilfældige matches sat i softwaren med en minimum miRNA frølængde på 7.