Epigenética en el TDAH

Año 1: Reclutamiento de 100 pacientes con TDAH y 100 sujetos de control sanos (conjunto de entrenamiento) para desarrollar un panel de diagnóstico de miARN para el TDAH

1. Para este estudio se reclutarán cien pacientes elegibles con TDAH que están siendo tratados en el Departamento de Psiquiatría Infantil para pacientes ambulatorios del Hospital Kaohsiung Chang Gung Memorial en Taiwán. Se encontrarán cien sujetos de control de la misma edad y género en la misma área de captación que la de los pacientes. Después de obtener el consentimiento informado de sus padres o tutores, los psiquiatras de investigación entrevistarán a los participantes utilizando el K-SADS-E para confirmar el diagnóstico. Los participantes también se someterán a la evaluación WISC-IV para excluir discapacidades intelectuales.

2. Tanto para los pacientes con TDAH como para los sujetos de control sanos, psicólogos infantiles experimentados administrarán las pruebas Conners CPT y Conners CATA en una sala diseñada para reducir las condiciones de prueba inconsistentes. Los padres o tutores deberán completar el formulario para padres SNAP-IV y el SAICA; los maestros de los pacientes deberán completar el formulario de maestro SNAP-IV; y el ADHD-RS y el CGI serán completados y calificados, respectivamente, por un psiquiatra infantil.

3. Se recolectará sangre venosa de cada participante en un tubo con anticoagulante EDTA. Las muestras de sangre se procesarán posteriormente con el kit de aislamiento de miARN mirVana (tecnología Life) para extraer los ARN totales. Según los hallazgos preliminares, se determinarán los valores de ΔCt de los 22 miARN candidatos para las 100 muestras de TDAH y las 100 muestras de control. Luego, los 10 miARN con el valor de p más pequeño serán elegidos para desarrollar un panel de diagnóstico de miARN para el TDAH en el segundo año.

4. Los pacientes con TDAH y los controles sanos tendrán 12 meses de seguimiento. Los procedimientos de tratamiento durante ese tiempo para pacientes con TDAH serán determinados por la práctica tradicional de los psiquiatras de los pacientes y el acuerdo de los pacientes y sus padres.

1. A los pacientes con TDAH que decidan recibir tratamiento médico se les prescribirá MPH de acción corta oral (MPH-IR) dos o tres veces al día, oscilando cada dosis entre 0,3 y 1,0 mg/kg, que se determinará en función de la gravedad de su cuadro clínico. síntomas, así como su edad, altura y peso corporal.
2. La dosis se ajustará cada dos semanas para mejorar adecuadamente los síntomas del TDAH. Se permiten cambios a MPH de acción prolongada (Ritalin-LA) o metilfenidato de liberación prolongada (Concerta) según los requisitos clínicos. Las dosis máximas de MPH-IR y Ritalin-LA por día son de 60 mg y de Concerta de 54 mg, ya que estas son las dosis máximas diarias aprobadas en Taiwán. La dosis se reducirá en caso de que surjan condiciones adversas clínicamente intolerables. La dosis de titulación final de MPH con una respuesta aceptable se mantendrá durante el período de seguimiento.
3. Los medicamentos concomitantes están prohibidos. El cumplimiento del régimen de medicamentos se verificará en cada visita con base en los informes de los padres de los pacientes y cuánto queda de la receta. Se considerarán abandonos los pacientes que inicien una nueva medicación entre los diferentes momentos del estudio.
4. Los pacientes con TDAH que deciden no recibir tratamiento médico suelen ser reevaluados por un psiquiatra infantil en consulta externa una vez al mes y pueden recibir terapia conductual o psicoterapia reeducativa durante el tiempo que dure el estudio.
5. Los sujetos de control sanos serán evaluados solo una vez, al inicio del estudio. 5. Los pacientes con TDAH serán reevaluados al duodécimo mes después del inicio. Se replicarán los procedimientos de evaluación, incluido el análisis de miARN y las medidas de TDAH, que se administraron al inicio del estudio.

Año 2: desarrollo de un modelo de clasificación de SVM e inscripción de un grupo de validación independiente con 50 pacientes con TDAH y 50 sujetos de control sanos (Conjunto de prueba)

1. Con base en las muestras ya recolectadas, se pueden determinar los 10 miARN expresados ​​de manera más diferencial entre el grupo TDAH y el grupo control. Esos 10 valores se pueden usar para derivar el modelo de clasificación SVM y crear un panel de diagnóstico de miARN sólido y confiable para el TDAH. Se aplicarán curvas de características operativas del receptor (ROC) para evaluar la validez de este panel de diagnóstico de miARN. Se espera que tanto la especificidad como la sensibilidad de este panel alcancen el 80 %.
2. Para el grupo de validación independiente (Conjunto de prueba), se reclutarán 50 pacientes elegibles con TDAH y 50 sujetos de control sanos de la misma edad y género. Los psiquiatras investigadores entrevistarán a los participantes utilizando el K-SADS-E para confirmar el diagnóstico, y los participantes también se someterán a una evaluación WISC-IV para excluir discapacidades intelectuales.
3. Todos los pacientes con TDAH y los sujetos de control sanos tendrán psicólogos infantiles experimentados que administrarán las pruebas CPT de Conners y CATA de Conners. Los padres o tutores de los participantes están obligados a completar el formulario de padres SNAP-IV y el SAICA; los maestros del paciente deben completar el formulario de maestro SNAP-IV; y el ADHD-RS y el CGI serán completados y calificados, respectivamente, por un psiquiatra infantil.
4. Se recolectará sangre venosa de cada participante utilizando un tubo anticoagulante EDTA. Las muestras de sangre se procesarán posteriormente con el kit de aislamiento de miARN mirVana (tecnología Life) para extraer los ARN totales. Los niveles de los 10 miRNA elegidos para el modelo de clasificación SVM se determinarán mediante qRT-PCR.
5. Para verificar los resultados del conjunto de entrenamiento, el panel de diagnóstico de miARN utilizará los datos de miARN del conjunto de prueba (tanto los 50 pacientes con TDAH como los 50 sujetos de control sanos) para realizar pruebas a ciegas. La validez de discriminación espera que tanto la sensibilidad como la especificidad alcancen el 80%.
6. El procedimiento de tratamiento y seguimiento de los pacientes con TDAH será el mismo que en el primer año. Los 100 pacientes con TDAH reclutados en el primer año serán seguidos y reevaluados

Año 3: Finalización del seguimiento de 12 meses de pacientes con TDAH y realización de análisis de genes diana y vías de enriquecimiento de los miARN

1. No se reclutarán nuevos participantes en el tercer año. El seguimiento de 12 meses de los 150 pacientes con TDAH se completará durante este año.
2. La segunda evaluación de los pacientes con TDAH se llevará a cabo para concluir este estudio (doceavo mes después de la línea de base). Se replicarán los mismos procedimientos de evaluación que se administraron al inicio.

(1) Se recolectarán muestras de sangre y se procesarán nuevamente para extraer miRNAs-. (2) Un psiquiatra investigador entrevistará a los pacientes con TDAH utilizando el K-SADS-E para confirmar que los pacientes aún cumplen con los criterios de diagnóstico de TDAH.

(3) Los pacientes con TDAH se someterán a pruebas neuropsicológicas (WISC-IV, Conners CPT y Conners CATA) y el mismo calificador al inicio del estudio calificará sus síntomas conductuales (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS y CGI). Para evitar cualquier sesgo derivado de la medicación, se indicará a los pacientes con TDAH que no tomen su medicación el día de la valoración neuropsicológica.

3. Se identificarán las tendencias de los niveles de miARN durante el seguimiento de 12 meses. Se evaluarán los niveles diferenciales de miARN entre pacientes con tratamiento MPH versus sin tratamiento y entre pacientes que continúan versus aquellos que remiten del diagnóstico de TDAH. Se determinará si los miARN pueden funcionar como un biomarcador que represente la condición de TDAH después del tratamiento.

4. Los genes diana predichos y sus vías de enriquecimiento de los miARN expresados ​​diferencialmente se obtendrán utilizando TargetScan v6.2, miRWalk y DIANA-microT. La búsqueda se centrará exclusivamente en las regiones 3'-UTR de los miARN objetivo con un valor p de 0,05 que define la distribución de probabilidad de coincidencias aleatorias establecidas en el software con una longitud mínima de semilla de miARN de 7.