Эпигенетика при СДВГ

Год 1: набор 100 пациентов с СДВГ и 100 здоровых людей из контрольной группы (обучающая группа) для разработки панели диагностики миРНК для СДВГ.

1. Для этого исследования будут набраны сто подходящих пациентов с СДВГ, которые проходят лечение в амбулаторном отделении детской психиатрии мемориальной больницы Kaohsiung Chang Gung на Тайване. Сто контрольных субъектов соответствующего возраста и пола будут найдены в той же зоне охвата, что и пациенты. После получения информированного согласия их родителей или опекунов психиатры-исследователи должны опросить участников с помощью K-SADS-E для подтверждения диагноза. Участники также пройдут оценку WISC-IV, чтобы исключить умственную отсталость.

2. Как для пациентов с СДВГ, так и для здоровых субъектов контрольной группы опытные детские психологи будут проводить тестирование Conners CPT и Conners CATA в комнате, предназначенной для уменьшения противоречивых условий тестирования. Родители или опекуны должны будут заполнить родительскую форму SNAP-IV и форму SAICA; учителя пациентов должны будут заполнить форму учителя SNAP-IV; и ADHD-RS и CGI будут заполнены и оценены, соответственно, детским психиатром.

3. Венозная кровь будет взята у каждого участника в пробирку с антикоагулянтом ЭДТА. Образцы крови будут дополнительно обработаны с помощью набора для выделения микроРНК mirVana (технология Life) для извлечения общей РНК. На основании предварительных результатов будут определены значения ΔCt 22 микроРНК-кандидатов для 100 образцов СДВГ и 100 контрольных образцов. Затем будут выбраны 10 микроРНК с наименьшим p-значением для разработки диагностической панели микроРНК для СДВГ на второй год.

4. Пациенты с СДВГ и здоровые участники контрольной группы будут наблюдаться в течение 12 месяцев. Процедуры лечения в течение этого времени для пациентов с СДВГ будут определяться традиционной практикой психиатров пациентов и соглашением пациентов и их родителей.

1. Пациентам с СДВГ, решившим получить медикаментозное лечение, будет назначен пероральный короткодействующий МФ (MPH-IR) два или три раза в день, при этом каждая доза находится в диапазоне от 0,3 до 1,0 мг/кг, которая должна определяться в зависимости от тяжести их клинического состояния. симптомов, а также их возраст, рост и массу тела.
2. Дозировка будет корректироваться каждые две недели, чтобы должным образом улучшить симптомы СДВГ. В зависимости от клинических требований разрешены замены на МФХ длительного действия (Риталин-ЛА) или метилфенидат пролонгированного действия (Концерта). Максимальные суточные дозы MPH-IR и Ritalin-LA составляют 60 мг, а Concerta — 54 мг, так как это максимальные суточные дозы, одобренные на Тайване. Доза будет уменьшена в случае возникновения каких-либо клинически непереносимых нежелательных явлений. Окончательная доза титрования MPH с приемлемым ответом будет поддерживаться в течение периода наблюдения.
3. Сопутствующие препараты запрещены. Соблюдение режима приема лекарств будет проверяться при каждом посещении на основании отчетов родителей пациентов и того, сколько рецепта осталось. Пациенты, которые начинают принимать новое лекарство между разными временными точками исследования, будут считаться выбывшими.
4. Пациенты с СДВГ, решившие не получать медикаментозное лечение, обычно проходят повторное обследование у детского психиатра в амбулаторном отделении один раз в месяц и могут получать поведенческую терапию или перевоспитательную психотерапию на время исследования.
5. Здоровые контрольные субъекты будут оцениваться только один раз, на исходном уровне. 5. Пациенты с СДВГ будут повторно обследованы на двенадцатом месяце после исходного уровня. Процедуры оценки, включая анализ микроРНК и показатели СДВГ, которые применялись на исходном уровне, будут воспроизведены.

Год 2: Разработка модели классификации SVM и зачисление независимой проверочной группы из 50 пациентов с СДВГ и 50 здоровых контрольных субъектов (набор для тестирования)

1. На основе уже собранных образцов можно определить 10 наиболее дифференциально экспрессируемых микроРНК между группой СДВГ и контрольной группой. Эти 10 значений можно использовать для получения модели классификации SVM и создания надежной и надежной диагностической панели микроРНК для СДВГ. Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) будут применяться для оценки достоверности этой панели диагностики микроРНК. Ожидается, что как специфичность, так и чувствительность этой панели достигнут 80%.
2. Для независимой контрольной группы (набор для тестирования) будут набраны 50 подходящих пациентов с СДВГ и 50 здоровых контрольных субъектов того же возраста и пола. Психиатры-исследователи возьмут интервью у участников, используя K-SADS-E, чтобы подтвердить диагноз, и участники также пройдут оценку WISC-IV, чтобы исключить умственную отсталость.
3. Все пациенты с СДВГ и здоровые субъекты контрольной группы должны пройти тесты CPT и CATA Коннерса, проводимые опытными детскими психологами. Родители или опекуны участников должны заполнить родительскую форму SNAP-IV и форму SAICA; учителя пациента должны заполнить форму учителя SNAP-IV; и ADHD-RS и CGI будут заполнены и оценены, соответственно, детским психиатром.
4. Венозная кровь будет собираться у каждого участника с помощью пробирки с антикоагулянтом ЭДТА. Образцы крови будут дополнительно обработаны с помощью набора для выделения микроРНК mirVana (технология Life) для извлечения общей РНК. Уровни 10 микроРНК, выбранных для модели классификации SVM, будут определяться с помощью qRT-PCR.
5. Чтобы проверить результаты тренировочного набора, данные микроРНК из набора для тестирования (как 50 пациентов с СДВГ, так и 50 здоровых контрольных субъектов) будут использоваться для слепого тестирования панелью диагностики микроРНК. Достоверность дискриминации предполагает, что как чувствительность, так и специфичность достигают 80%.
6. Процедура лечения и последующего наблюдения за пациентами с СДВГ будет такой же, как и в первый год. 100 пациентов с СДВГ, набранных в течение первого года, будут наблюдаться и переоцениваться.

Год 3: Завершение 12-месячного наблюдения за пациентами с СДВГ и проведение анализа генов-мишеней и путей накопления микроРНК.

1. На третий год новые участники не набираются. В течение этого года будет завершено 12-месячное наблюдение за всеми 150 пациентами с СДВГ.
2. Вторая оценка пациентов с СДВГ будет проведена для завершения этого исследования (двенадцатый месяц после исходного уровня). Будут воспроизведены те же процедуры оценки, которые применялись на исходном уровне.

(1) Образцы крови будут собраны и снова обработаны для извлечения миРНК-. (2) Психиатр-исследователь проведет опрос пациентов с СДВГ, используя K-SADS-E, чтобы подтвердить, что пациенты по-прежнему соответствуют диагностическим критериям СДВГ.

(3) Пациенты с СДВГ будут проходить нейропсихологическое тестирование (WISC-IV, Conners CPT и Conners CATA), а их поведенческие симптомы оцениваются (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS и CGI) тем же оценщиком на исходном уровне. Чтобы избежать какой-либо предвзятости, связанной с приемом лекарств, пациентам с СДВГ будет рекомендовано не принимать лекарства в день нейропсихологической оценки.

3. Будут определены тенденции уровней микроРНК в течение 12 месяцев наблюдения. Будут оцениваться дифференциальные уровни миРНК между пациентами с лечением MPH по сравнению с пациентами без лечения, а также между пациентами, которые продолжают лечение, и теми, кто перестает страдать от диагноза СДВГ. Будет определено, могут ли микроРНК функционировать в качестве биомаркера, отражающего состояние СДВГ после лечения.

4. Предсказанные гены-мишени и пути их обогащения дифференциально экспрессируемыми микроРНК будут получены с использованием TargetScan v6.2, miRWalk и DIANA-microT. Поиск будет сосредоточен исключительно на областях 3'-UTR целевых miRNAs с p-значением 0,05, определяющим распределение вероятности случайных совпадений, установленных в программном обеспечении, с минимальной начальной длиной miRNA 7.