Epigenetica nell'ADHD

Anno 1: Reclutamento di 100 pazienti con ADHD e 100 soggetti di controllo sani (set di formazione) per sviluppare un pannello diagnostico miRNA per l'ADHD

1. Per questo studio saranno reclutati cento pazienti con ADHD idonei che sono in cura presso il Dipartimento ambulatoriale di psichiatria infantile del Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital di Taiwan. Cento soggetti di controllo abbinati per età e sesso saranno trovati nello stesso bacino di utenza di quello dei pazienti. Dopo aver ottenuto il consenso informato dai loro genitori o tutori, gli psichiatri di ricerca devono intervistare i partecipanti utilizzando il K-SADS-E per confermare la diagnosi. I partecipanti saranno inoltre sottoposti a valutazione WISC-IV per escludere le disabilità intellettive.

2. Sia per i pazienti ADHD che per i soggetti sani di controllo, psicologi infantili esperti somministreranno i test Conners CPT e Conners CATA in una stanza progettata per ridurre le condizioni di test incoerenti. I genitori o i tutori dovranno compilare il modulo genitore SNAP-IV e il SAICA; gli insegnanti dei pazienti dovranno compilare il modulo per insegnanti SNAP-IV; e l'ADHD-RS e il CGI saranno completati e valutati, rispettivamente, da uno psichiatra infantile.

3. Il sangue venoso verrà raccolto da ciascun partecipante in una provetta con anticoagulante EDTA. I campioni di sangue saranno ulteriormente processati con il kit di isolamento dei miRNA mirVana (tecnologia Life) per estrarre gli RNA totali. Sulla base dei risultati preliminari, i valori ΔCt dei 22 miRNA candidati saranno determinati per i 100 campioni ADHD e 100 campioni di controllo. Quindi i 10 miRNA con il p-value più basso saranno scelti per sviluppare un pannello diagnostico di miRNA per l'ADHD nel secondo anno.

4. I pazienti con ADHD e i soggetti sani di controllo avranno 12 mesi di follow-up. Le procedure di trattamento durante quel periodo per i pazienti con ADHD saranno determinate dalla pratica tradizionale degli psichiatri dei pazienti e dall'accordo dei pazienti e dei loro genitori.

1. Ai pazienti con ADHD che decidono di ricevere un trattamento medico verrà prescritto MPH orale a breve durata d'azione (MPH-IR) due o tre volte al giorno, con ciascuna dose compresa tra 0,3 e 1,0 mg/kg, che sarà determinata in base alla gravità della loro condizione clinica. sintomi, così come la loro età, altezza e peso corporeo.
2. Il dosaggio verrà aggiustato ogni due settimane per migliorare adeguatamente i sintomi dell'ADHD. Le modifiche all'MPH a lunga durata d'azione (Ritalin-LA) o al metilfenidato a rilascio prolungato (Concerta) sono consentite a seconda delle esigenze cliniche. Le dosi massime giornaliere di MPH-IR e Ritalin-LA sono di 60 mg e di Concerta di 54 mg, poiché queste sono le dosi massime giornaliere approvate a Taiwan. La dose verrà ridotta qualora si verificassero condizioni avverse clinicamente intollerabili. La dose di titolazione finale di MPH con una risposta accettabile verrà mantenuta per tutto il periodo di follow-up.
3. Sono vietati i farmaci concomitanti. Il rispetto del regime farmacologico sarà verificato ad ogni visita sulla base delle segnalazioni dei genitori dei pazienti e di quanto rimane della prescrizione. I pazienti che iniziano un nuovo farmaco tra i diversi punti temporali dello studio saranno considerati abbandoni.
4. I pazienti con ADHD che decidono di non ricevere cure mediche vengono solitamente rivalutati da uno psichiatra infantile nel reparto ambulatoriale una volta al mese e possono ricevere terapia comportamentale o psicoterapia rieducativa per la durata dello studio.
5. I soggetti sani di controllo saranno valutati solo una volta, al basale. 5. I pazienti con ADHD saranno rivalutati al dodicesimo mese dopo il basale. Verranno replicate le procedure di valutazione, inclusa l'analisi dei miRNA e le misure ADHD, che sono state somministrate al basale.

Anno 2: sviluppo di un modello di classificazione SVM e arruolamento di un gruppo di convalida indipendente con 50 pazienti ADHD e 50 soggetti sani di controllo (set di test)

1. Sulla base dei campioni già raccolti, è possibile determinare i 10 miRNA espressi in modo più differenziato tra il gruppo ADHD e il gruppo di controllo. Questi 10 valori possono essere utilizzati per derivare il modello di classificazione SVM e creare un pannello di diagnosi miRNA affidabile e forte per l'ADHD. Le curve delle caratteristiche operative del ricevitore (ROC) verranno applicate per valutare la validità di questo pannello di diagnosi di miRNA. Sia la specificità che la sensibilità di questo panel dovrebbero raggiungere l'80%.
2. Per il gruppo di validazione indipendente (Set di test), verranno reclutati 50 pazienti idonei con ADHD e 50 soggetti sani di controllo abbinati per età e sesso. Gli psichiatri di ricerca intervisteranno i partecipanti utilizzando il K-SADS-E per confermare la diagnosi, e i partecipanti saranno anche sottoposti a valutazione WISC-IV per escludere disabilità intellettive.
3. Tutti i pazienti con ADHD e soggetti di controllo sani avranno sperimentato psicologi infantili che somministreranno il test CPT di Conners e CATA di Conners. I genitori o tutori dei partecipanti sono tenuti a compilare il modulo genitori SNAP-IV e il SAICA; gli insegnanti del paziente sono tenuti a compilare il modulo insegnante SNAP-IV; e l'ADHD-RS e il CGI saranno completati e valutati, rispettivamente, da uno psichiatra infantile.
4. Il sangue venoso verrà raccolto da ciascun partecipante utilizzando una provetta anticoagulante EDTA. I campioni di sangue saranno ulteriormente processati con il kit di isolamento dei miRNA mirVana (tecnologia Life) per estrarre gli RNA totali. I livelli dei 10 miRNA scelti per il modello di classificazione SVM saranno determinati mediante qRT-PCR.
5. Per verificare i risultati del Training Set, i dati dei miRNA del Testing Set (sia i 50 pazienti con ADHD che i 50 soggetti sani di controllo) saranno utilizzati per il test in cieco dal pannello diagnostico dei miRNA. La validità della discriminazione prevede che sia la sensibilità che la specificità raggiungano l'80%.
6. La procedura di trattamento e follow-up per i pazienti con ADHD sarà la stessa del primo anno. I 100 pazienti ADHD reclutati nel primo anno saranno seguiti e rivalutati

Anno 3: Completamento del follow-up di 12 mesi dei pazienti con ADHD ed esecuzione dell'analisi dei geni bersaglio e dei percorsi di arricchimento dei miRNA

1. Nessun nuovo partecipante sarà reclutato nel terzo anno. Il follow-up di 12 mesi di tutti i 150 pazienti con ADHD sarà completato durante quest'anno.
2. La seconda valutazione dei pazienti con ADHD sarà effettuata per concludere questo studio (dodicesimo mese dopo il basale). Verranno replicate le stesse procedure di valutazione somministrate al basale.

(1) I campioni di sangue saranno raccolti e processati nuovamente per estrarre i miRNA-. (2) Uno psichiatra ricercatore intervisterà i pazienti con ADHD utilizzando il K-SADS-E per confermare che i pazienti soddisfano ancora i criteri diagnostici dell'ADHD.

(3) I pazienti con ADHD saranno sottoposti a test neuropsicologici (WISC-IV, Conners CPT e Conners CATA) e avranno i loro sintomi comportamentali valutati (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS e CGI) dallo stesso valutatore al basale. Per evitare qualsiasi pregiudizio derivato dai farmaci, ai pazienti con ADHD verrà detto di non assumere i loro farmaci il giorno della valutazione neuropsicologica.

3. Saranno identificate le tendenze dei livelli di miRNA durante il follow-up di 12 mesi. Verranno valutati i livelli differenziali di miRNA tra i pazienti con rispetto a quelli senza trattamento con MPH e tra i pazienti che continuano rispetto a quelli che regrediscono dalla diagnosi di ADHD. Verrà determinato se i miRNA possono funzionare come biomarcatore che ritrae la condizione di ADHD dopo il trattamento.

4. I geni target previsti e le loro vie di arricchimento dei miRNA differenzialmente espressi saranno ottenuti utilizzando TargetScan v6.2, miRWalk e DIANA-microT. La ricerca si concentrerà esclusivamente sulle regioni 3'-UTR dei miRNA target con un valore p di 0,05 che definisce la distribuzione di probabilità delle corrispondenze casuali impostate nel software con una lunghezza minima del seme di miRNA di 7.