Epigenetica bij ADHD

Jaar 1: Werven van 100 ADHD-patiënten en 100 gezonde controlepersonen (Trainingsset) om een ​​miRNA-diagnosepanel voor ADHD te ontwikkelen

1. Honderd in aanmerking komende ADHD-patiënten die worden behandeld op de polikliniek kinderpsychiatrie in het Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital in Taiwan zullen voor dit onderzoek worden gerekruteerd. Honderd qua leeftijd en geslacht gematchte controlepersonen zullen worden gevonden in hetzelfde verzorgingsgebied als dat van de patiënten. Na het verkrijgen van geïnformeerde toestemming van hun ouders of voogden, zullen onderzoekspsychiaters de deelnemers interviewen met behulp van de K-SADS-E om de diagnose te bevestigen. De deelnemers ondergaan ook een WISC-IV-beoordeling om verstandelijke beperkingen uit te sluiten.

2. Voor zowel de ADHD-patiënten als de gezonde controlepersonen zullen ervaren kinderpsychologen Conners CPT- en Conners CATA-testen uitvoeren in een ruimte die is ontworpen om inconsistente testomstandigheden te verminderen. Ouders of voogden moeten het SNAP-IV ouderformulier en de SAICA invullen; leraren van patiënten moeten het SNAP-IV lerarenformulier invullen; en de ADHD-RS en de CGI worden respectievelijk ingevuld en beoordeeld door een kinderpsychiater.

3. Bij elke deelnemer wordt veneus bloed afgenomen in een EDTA-antistollingsbuisje. De bloedmonsters worden verder verwerkt met de mirVana miRNA-isolatiekit (Life-technologie) om totale RNA's te extraheren. Op basis van de voorlopige bevindingen zullen de ΔCt-waarden van de 22 kandidaat-miRNA's worden bepaald voor de 100 ADHD-monsters en 100 controlemonsters. Vervolgens worden de 10 miRNA's met de kleinste p-waarde gekozen om in het tweede jaar een miRNA's-diagnosepanel voor ADHD te ontwikkelen.

4. De ADHD-patiënten en gezonde controlepersonen krijgen 12 maanden follow-up. De behandelingsprocedures gedurende die tijd voor patiënten met ADHD zullen worden bepaald door de traditionele praktijk van de psychiaters van de patiënten en de instemming van patiënten en hun ouders.

1. ADHD-patiënten die besluiten medische behandeling te ondergaan, krijgen twee- of driemaal daags orale kortwerkende MPH (MPH-IR) voorgeschreven, waarbij elke dosis varieert tussen 0,3 en 1,0 mg/kg, die zal worden bepaald op basis van de ernst van hun klinische symptomen, evenals hun leeftijd, lengte en lichaamsgewicht.
2. De dosering wordt elke twee weken aangepast om de ADHD-symptomen goed te verbeteren. Wijzigingen in langwerkende MPH (Ritalin-LA) of methylfenidaat met verlengde afgifte (Concerta) zijn toegestaan, afhankelijk van de klinische vereisten. De maximale doses van MPH-IR en Ritalin-LA per dag zijn 60 mg en van Concerta is 54 mg, aangezien dit de maximale dagelijkse doses zijn die in Taiwan zijn goedgekeurd. De dosis zal worden verlaagd als zich klinisch onaanvaardbare bijwerkingen voordoen. De uiteindelijke titratiedosis van MPH met een aanvaardbare respons zal worden gehandhaafd gedurende de follow-upperiode.
3. Gelijktijdige medicijnen zijn verboden. Naleving van het medicijnregime zal bij elk bezoek worden geverifieerd op basis van rapporten van de ouders van de patiënt en hoeveel van het recept er nog over is. Patiënten die tussen de verschillende tijdstippen van de studie met een nieuw medicijn beginnen, worden als drop-outs beschouwd.
4. De ADHD-patiënten die besluiten geen medische behandeling te ondergaan, worden gewoonlijk één keer per maand opnieuw beoordeeld door een kinderpsychiater op de polikliniek en kunnen gedragstherapie of heropvoedingspsychotherapie krijgen voor de duur van het onderzoek.
5. De gezonde controlepersonen worden slechts één keer beoordeeld, bij de nulmeting. 5. Patiënten met ADHD worden twaalf maanden na baseline opnieuw beoordeeld. De beoordelingsprocedures, inclusief miRNAs-analyse en ADHD-metingen, die bij baseline werden uitgevoerd, zullen worden gerepliceerd.

Jaar 2: Ontwikkeling van een SVM-classificatiemodel en deelname aan een onafhankelijke validatiegroep met 50 ADHD-patiënten en 50 gezonde controlepersonen (testset)

1. Op basis van de reeds verzamelde monsters kunnen de 10 meest differentieel tot expressie gebrachte miRNA's tussen de ADHD-groep en de controlegroep worden bepaald. Die 10 waarden kunnen worden gebruikt om het SVM-classificatiemodel af te leiden en een betrouwbaar en sterk miRNA-diagnosepanel voor ADHD te creëren. Om de validiteit van dit miRNA-diagnosepanel te evalueren, zullen receiver operating Characteristic (ROC)-curven worden toegepast. Zowel de specificiteit als de sensitiviteit van dit panel zullen naar verwachting 80% bereiken.
2. Voor de onafhankelijke validatiegroep (testset) zullen 50 in aanmerking komende patiënten met ADHD en 50 qua leeftijd en geslacht gematchte gezonde controlepersonen worden geworven. Onderzoekspsychiaters zullen de deelnemers interviewen met behulp van de K-SADS-E om de diagnose te bevestigen, en de deelnemers zullen ook een WISC-IV-beoordeling ondergaan om verstandelijke beperkingen uit te sluiten.
3. Alle ADHD-patiënten en gezonde controlepersonen zullen door ervaren kinderpsychologen Conners' CPT- en Conners' CATA-testen laten uitvoeren. De ouders of verzorgers van de deelnemers zijn verplicht het SNAP-IV ouderformulier en de SAICA in te vullen; de docenten van de patiënt moeten het SNAP-IV docentenformulier invullen; en de ADHD-RS en de CGI worden respectievelijk ingevuld en beoordeeld door een kinderpsychiater.
4. Bij elke deelnemer wordt veneus bloed afgenomen met behulp van een EDTA-antistollingsbuisje. De bloedmonsters worden verder verwerkt met de mirVana miRNA-isolatiekit (Life-technologie) om totale RNA's te extraheren. De niveaus van de 10 miRNA's die zijn gekozen voor het SVM-classificatiemodel zullen worden bepaald door qRT-PCR.
5. Om de resultaten van de trainingsset te verifiëren, zullen de miRNAs-gegevens van de testset (zowel de 50 ADHD-patiënten als de 50 gezonde controlepersonen) worden gebruikt voor blinde tests door het miRNA-diagnosepanel. De discriminatievaliditeit verwacht dat zowel de sensitiviteit als de specificiteit 80% bereiken.
6. De behandel- en nazorgprocedure voor ADHD-patiënten is hetzelfde als in het eerste jaar. De 100 ADHD-patiënten die in het eerste jaar zijn aangeworven, zullen worden gevolgd en opnieuw geëvalueerd

Jaar 3: Voltooiing van de 12 maanden durende follow-up van ADHD-patiënten en uitvoeren van analyse van doelwitgenen en verrijkingsroutes van de miRNA's

1. In het derde jaar worden geen nieuwe deelnemers geworven. De 12 maanden durende follow-up van alle 150 patiënten met ADHD zal in de loop van dit jaar worden afgerond.
2. De tweede beoordeling van patiënten met ADHD zal worden uitgevoerd om deze studie af te ronden (twaalfde maand na baseline). Dezelfde beoordelingsprocedures die bij baseline werden uitgevoerd, zullen worden herhaald.

(1) Er zullen bloedmonsters worden afgenomen en opnieuw worden verwerkt om miRNA's te extraheren. (2) Een onderzoekspsychiater zal de ADHD-patiënten interviewen met behulp van de K-SADS-E om te bevestigen dat de patiënten nog steeds voldoen aan de diagnostische criteria van ADHD.

(3) Patiënten met ADHD ondergaan neuropsychologische tests (WISC-IV, Conners CPT en Conners CATA) en hun gedragssymptomen worden beoordeeld (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS en CGI) door dezelfde beoordelaar bij baseline. Om vooringenomenheid als gevolg van medicatie te voorkomen, zullen ADHD-patiënten worden verteld om hun medicatie niet in te nemen op de dag van de neuropsychologische beoordeling.

3. De trends van de miRNA-waarden tijdens de follow-up van 12 maanden worden geïdentificeerd. De differentiële miRNA-niveaus tussen patiënten met versus zonder MPH-behandeling en tussen patiënten die doorgaan versus degenen die de diagnose ADHD kwijtraken, zullen worden geëvalueerd. Of miRNA's na behandeling kunnen functioneren als biomarker die de ADHD-aandoening weergeeft, zal worden bepaald.

4. De voorspelde doelwitgenen en hun verrijkingsroutes van de differentieel tot expressie gebrachte miRNA's zullen worden verkregen met behulp van TargetScan v6.2, miRWalk en DIANA-microT. De zoektocht zal zich uitsluitend richten op de 3'-UTR-regio's van de beoogde miRNA's met een p-waarde van 0,05 die de waarschijnlijkheidsverdeling definieert van willekeurige overeenkomsten die in de software zijn ingesteld met een minimale miRNA-zaadlengte van 7.