Epigenetik vid ADHD

År 1: Rekrytering av 100 ADHD-patienter och 100 friska kontrollpersoner (Training Set) för att utveckla en miRNA-diagnospanel för ADHD

1. Hundra berättigade ADHD-patienter som behandlas på polikliniken för barnpsykiatri vid Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital i Taiwan kommer att rekryteras för denna studie. Hundra ålders- och könsmatchade kontrollpersoner kommer att finnas i samma upptagningsområde som patienternas. Efter att ha erhållit informerat samtycke från sina föräldrar eller vårdnadshavare ska forskningspsykiatriker intervjua deltagarna som använder K-SADS-E för att bekräfta diagnosen. Deltagarna kommer också att genomgå WISC-IV-bedömning för att utesluta intellektuella funktionsnedsättningar.

2. För både ADHD-patienterna och de friska kontrollpersonerna kommer erfarna barnpsykologer att administrera Conners CPT- och Conners CATA-tester i ett rum utformat för att minska inkonsekventa testförhållanden. Föräldrar eller vårdnadshavare kommer att behöva fylla i SNAP-IV föräldraformuläret och SAICA; patienters lärare kommer att behöva fylla i SNAP-IV-lärarformuläret; och ADHD-RS och CGI kommer att kompletteras och betygsättas av en barnpsykiater.

3. Venöst blod kommer att samlas in från varje deltagare i ett EDTA-antikoagulantrör. Blodproverna kommer att bearbetas ytterligare med mirVana miRNA-isoleringskit (Life technology) för att extrahera totala RNA. Baserat på de preliminära resultaten kommer ΔCt-värdena för de 22 kandidatmiRNA:erna att bestämmas för de 100 ADHD-proverna och 100 kontrollproverna. Sedan kommer de 10 miRNA med det lägsta p-värdet att väljas för att utveckla en miRNAs diagnospanel för ADHD under det andra året.

4. ADHD-patienterna och friska kontrollpersoner kommer att ha 12 månaders uppföljning. Behandlingsrutinerna under den tiden för patienter med ADHD kommer att bestämmas av patienternas psykiatrikers traditionella praxis och överenskommelse mellan patienter och deras föräldrar.

1. ADHD-patienter som bestämmer sig för att få medicinsk behandling kommer att ordineras oralt kortverkande MPH (MPH-IR) två eller tre gånger dagligen, med varje dos på mellan 0,3 och 1,0 mg/kg, vilket ska bestämmas baserat på svårighetsgraden av deras kliniska symtom, såväl som deras ålder, längd och kroppsvikt.
2. Dosen kommer att justeras varannan vecka för att korrekt förbättra ADHD-symptomen. Ändringar av långverkande MPH (Ritalin-LA) eller metylfenidat med förlängd frisättning (Concerta) är tillåtna beroende på kliniska krav. De maximala doserna MPH-IR och Ritalin-LA per dag är 60 mg och Concerta är 54 mg, eftersom dessa är de maximala dagliga doserna som godkänts i Taiwan. Dosen kommer att minskas om några kliniskt oacceptabla ogynnsamma tillstånd uppstår. Den slutliga titreringsdosen av MPH med ett acceptabelt svar kommer att bibehållas under uppföljningsperioden.
3. Samtidig medicinering är förbjuden. Överensstämmelse med läkemedelsregimen kommer att verifieras vid varje besök baserat på rapporter från patienternas föräldrar och hur mycket av receptet som återstår. Patienter som påbörjar ett nytt läkemedel mellan studiens olika tidpunkter kommer att betraktas som avhoppade.
4. De ADHD-patienter som bestämmer sig för att inte få medicinsk behandling utvärderas vanligtvis av en barnpsykiater på öppenvården en gång i månaden och kan få beteendeterapi eller omskolande psykoterapi under studietiden.
5. De friska kontrollpersonerna kommer endast att bedömas en gång, vid baslinjen. 5. Patienter med ADHD kommer att utvärderas på nytt vid den tolfte månaden efter baslinjen. Utvärderingsprocedurerna, inklusive miRNA-analys och ADHD-åtgärder, som administrerades vid baslinjen kommer att replikeras.

År 2: Utveckla en SVM-klassificeringsmodell och registrera en oberoende valideringsgrupp med 50 ADHD-patienter och 50 friska kontrollpersoner (Testset)

1. Baserat på de prover som redan samlats in kan de 10 mest differentiellt uttryckta miRNA mellan ADHD-gruppen och kontrollgruppen bestämmas. Dessa 10 värden kan användas för att härleda SVM-klassificeringsmodellen och skapa en pålitlig och stark miRNA-diagnospanel för ADHD. Receiver operating characteristic (ROC)-kurvor kommer att tillämpas för att utvärdera giltigheten av denna miRNA-diagnospanel. Både specificiteten och känsligheten för denna panel förväntas nå 80 %.
2. Till den oberoende valideringsgruppen (Testset) kommer 50 kvalificerade patienter med ADHD och 50 ålders- och könsmatchade friska kontrollpersoner att rekryteras. Forskningspsykiatriker kommer att intervjua deltagarna som använder K-SADS-E för att bekräfta diagnosen, och deltagarna kommer också att genomgå WISC-IV-bedömning för att utesluta intellektuella funktionsnedsättningar.
3. Alla ADHD-patienter och friska kontrollpersoner kommer att ha erfarna barnpsykologer som administrerar Conners CPT och Conners CATA-test. Deltagarnas föräldrar eller vårdnadshavare måste fylla i SNAP-IV föräldraformuläret och SAICA; patientens lärare måste fylla i SNAP-IV-lärarformuläret; och ADHD-RS och CGI kommer att kompletteras och betygsättas av en barnpsykiater.
4. Venöst blod kommer att samlas in från varje deltagare med hjälp av ett EDTA-antikoagulantrör. Blodproverna kommer att bearbetas ytterligare med mirVana miRNA-isoleringskit (Life technology) för att extrahera totala RNA. Nivåerna av de 10 miRNA som väljs för SVM-klassificeringsmodellen kommer att bestämmas med qRT-PCR.
5. För att verifiera resultaten av träningsuppsättningen kommer miRNA-data från testsetet (både de 50 ADHD-patienterna och de 50 friska kontrollpersonerna) att användas för blindtestning av miRNA-diagnospanelen. Diskrimineringsvaliditeten förväntar sig att både sensitiviteten och specificiteten ska nå 80 %.
6. Behandlings- och uppföljningsproceduren för ADHD-patienter kommer att vara densamma som under det första året. De 100 ADHD-patienter som rekryterats under det första året kommer att följas och omvärderas

År 3: Slutförande av 12-månadersuppföljningen av ADHD-patienter och utför analys av målgener och anrikningsvägar för miRNA:erna

1. Inga nya deltagare kommer att rekryteras under det tredje året. 12-månadersuppföljningen av alla 150 patienter med ADHD kommer att slutföras under detta år.
2. Den andra bedömningen av patienter med ADHD kommer att genomföras för att avsluta denna studie (tolfte månaden efter baslinjen). Samma bedömningsprocedurer som administrerades vid baslinjen kommer att replikeras.

(1) Blodprover kommer att samlas in och bearbetas igen för att extrahera miRNA-. (2) En forskningspsykiater kommer att intervjua ADHD-patienterna som använder K-SADS-E för att bekräfta att patienterna fortfarande uppfyller de diagnostiska kriterierna för ADHD.

(3) Patienter med ADHD kommer att genomgå neuropsykologiska tester (WISC-IV, Conners CPT och Conners CATA) och får sina beteendesymtom bedömda (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS och CGI) av samma bedömare vid baslinjen. För att undvika fördomar som härrör från medicinering kommer ADHD-patienter att bli tillsagda att inte ta sin medicin på dagen för den neuropsykologiska bedömningen.

3. Trenderna för miRNA-nivåerna under den 12 månader långa uppföljningen kommer att identifieras. De differentiella miRNA-nivåerna mellan patienter med kontra utan MPH-behandling och mellan patienter som fortsätter mot de som remitterar från ADHD-diagnosen kommer att utvärderas. Huruvida miRNA kan fungera som en biomarkör som skildrar ADHD-tillståndet efter behandling kommer att avgöras.

4. De förutsagda målgenerna och deras anrikningsvägar för de differentiellt uttryckta miRNA:erna kommer att erhållas med TargetScan v6.2, miRWalk och DIANA-microT. Sökningen kommer uteslutande att fokusera på 3'-UTR-regionerna av mål-miRNA med ett p-värde på 0,05 som definierar sannolikhetsfördelningen av slumpmässiga matchningar som ställs in i programvaran med en minsta miRNA-frölängd på 7.