Epigenetika u ADHD

Rok 1: Nábor 100 pacientů s ADHD a 100 zdravých kontrolních subjektů (školicí sada) pro vývoj miRNA diagnostického panelu pro ADHD

1. Do této studie bude přijato 100 způsobilých pacientů s ADHD, kteří jsou léčeni na ambulantním oddělení dětské psychiatrie v nemocnici Kaohsiung Chang Gung Memorial na Tchaj-wanu. Sto věkově a genderově odpovídajících kontrolních subjektů se bude nacházet ve stejné spádové oblasti jako pacienti. Po získání informovaného souhlasu od svých rodičů nebo opatrovníků výzkumní psychiatři povedou rozhovory s účastníky pomocí K-SADS-E, aby potvrdili diagnózu. Účastníci také podstoupí hodnocení WISC-IV k vyloučení mentálního postižení.

2. U pacientů s ADHD i u zdravých kontrolních subjektů budou zkušení dětští psychologové provádět testování Conners CPT a Conners CATA v místnosti určené ke snížení nekonzistentních testovacích podmínek. Rodiče nebo opatrovníci budou muset vyplnit rodičovský formulář SNAP-IV a SAICA; učitelé pacientů budou povinni vyplnit formulář pro učitele SNAP-IV; a ADHD-RS a CGI vyplní a ohodnotí dětský psychiatr.

3. Od každého účastníka bude odebrána venózní krev do antikoagulační zkumavky EDTA. Vzorky krve budou dále zpracovány pomocí izolační sady miRNA miRNA (Life technology) k extrakci celkových RNA. Na základě předběžných zjištění budou stanoveny hodnoty ACt 22 kandidátních miRNA pro 100 vzorků ADHD a 100 kontrolních vzorků. Poté bude vybráno 10 miRNA s nejmenší hodnotou p, aby se ve druhém roce vyvinul panel diagnostiky miRNA pro ADHD.

4. Pacienti s ADHD a zdravé kontrolní subjekty budou mít 12 měsíců sledování. Léčebné postupy během této doby pro pacienty s ADHD budou určeny tradiční praxí psychiatrů pacientů a dohodou pacientů a jejich rodičů.

1. Pacientům s ADHD, kteří se rozhodnou podstoupit lékařskou léčbu, bude předepsána perorální krátkodobě působící MPH (MPH-IR) dvakrát nebo třikrát denně, přičemž každá dávka se bude pohybovat mezi 0,3 a 1,0 mg/kg, která se určí na základě závažnosti jejich klinického stavu. příznaky, stejně jako jejich věk, výška a tělesná hmotnost.
2. Dávkování bude upravováno každé dva týdny, aby se řádně zlepšily příznaky ADHD. Změny na dlouhodobě působící MPH (Ritalin-LA) nebo methylfenidát s prodlouženým uvolňováním (Concerta) jsou povoleny v závislosti na klinických požadavcích. Maximální dávky MPH-IR a Ritalin-LA za den jsou 60 mg a Concerta je 54 mg, protože to jsou maximální denní dávky schválené na Tchaj-wanu. Dávka bude snížena, pokud se objeví jakékoli klinicky netolerovatelné nežádoucí stavy. Konečná titrační dávka MPH s přijatelnou odpovědí bude udržována po dobu sledování.
3. Souběžné podávání léků je zakázáno. Dodržování lékového režimu bude ověřováno při každé návštěvě na základě zpráv rodičů pacientů a toho, kolik z receptu zbývá. Pacienti, kteří začnou novou medikaci mezi různými časovými body studie, budou považováni za pacienty, kteří předčasně ukončili léčbu.
4. Pacienti s ADHD, kteří se rozhodnou nepodstoupit lékařskou léčbu, jsou obvykle jednou měsíčně znovu posouzeni dětským psychiatrem v ambulanci a po dobu studie mohou absolvovat behaviorální terapii nebo reedukační psychoterapii.
5. Zdravé kontrolní subjekty budou hodnoceny pouze jednou, na začátku. 5. Pacienti s ADHD budou znovu posouzeni ve dvanáctém měsíci po výchozím stavu. Postupy hodnocení, včetně analýzy miRNA a měření ADHD, které byly aplikovány na začátku, budou replikovány.

Rok 2: Vývoj modelu klasifikace SVM a zařazení nezávislé validační skupiny s 50 pacienty s ADHD a 50 zdravými kontrolními subjekty (Testovací sada)

1. Na základě již shromážděných vzorků lze určit 10 nejvíce rozdílně exprimovaných miRNA mezi skupinou ADHD a kontrolní skupinou. Těchto 10 hodnot lze použít k odvození modelu klasifikace SVM a vytvoření spolehlivého a silného panelu diagnostiky miRNA pro ADHD. K vyhodnocení platnosti tohoto miRNA diagnostického panelu budou použity křivky operačních charakteristik přijímače (ROC). Očekává se, že specificita i senzitivita tohoto panelu dosáhne 80 %.
2. Pro nezávislou validační skupinu (Testovací sada) bude přijato 50 vhodných pacientů s ADHD a 50 zdravých kontrolních subjektů stejného věku a pohlaví. Výzkumní psychiatři povedou rozhovory s účastníky pomocí K-SADS-E, aby potvrdili diagnózu, a účastníci také podstoupí hodnocení WISC-IV k vyloučení mentálního postižení.
3. U všech pacientů s ADHD a zdravých kontrolních subjektů budou zkušení dětští psychologové provádět Connersův CPT a Connersův CATA test. Rodiče nebo opatrovníci účastníků jsou povinni vyplnit rodičovský formulář SNAP-IV a SAICA; učitelé pacienta jsou povinni vyplnit formulář učitele SNAP-IV; a ADHD-RS a CGI vyplní a ohodnotí dětský psychiatr.
4. Od každého účastníka bude odebrána venózní krev pomocí antikoagulační zkumavky EDTA. Vzorky krve budou dále zpracovány pomocí izolační sady miRNA miRNA (Life technology) k extrakci celkových RNA. Hladiny 10 miRNA zvolených pro model klasifikace SVM budou určeny pomocí qRT-PCR.
5. K ověření výsledků tréninkové sady budou miRNA data testovací sady (jak 50 pacientů s ADHD, tak 50 zdravých kontrolních subjektů) použita pro slepé testování diagnostickým panelem miRNA. Diskriminační validita očekává, že jak senzitivita, tak specificita dosáhne 80 %.
6. Postup léčby a sledování u pacientů s ADHD bude stejný jako v prvním roce. 100 pacientů s ADHD přijatých v prvním roce bude sledováno a přehodnoceno

Rok 3: Dokončení 12měsíčního sledování pacientů s ADHD a provedení analýzy cílových genů a drah obohacování miRNA

1. Ve třetím ročníku nebudou přijímáni žádní noví účastníci. 12měsíční sledování všech 150 pacientů s ADHD bude dokončeno v průběhu letošního roku.
2. K uzavření této studie bude provedeno druhé hodnocení pacientů s ADHD (dvanáctý měsíc po výchozím stavu). Budou opakovány stejné postupy hodnocení, které byly aplikovány na začátku.

(1) Vzorky krve budou odebrány a znovu zpracovány k extrakci miRNA-. (2) Výzkumný psychiatr provede rozhovory s pacienty s ADHD pomocí K-SADS-E, aby potvrdil, že pacienti stále splňují diagnostická kritéria ADHD.

(3) Pacienti s ADHD podstoupí neuropsychologické testování (WISC-IV, Conners CPT a Conners CATA) a jejich behaviorální symptomy budou hodnoceny (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS a CGI) stejným hodnotitelem na začátku studie. Aby se předešlo jakémukoli zkreslení způsobenému medikací, bude pacientům s ADHD v den neuropsychologického vyšetření řečeno, aby své léky neužívali.

3. Budou identifikovány trendy hladin miRNA během 12měsíčního sledování. Budou vyhodnoceny diferenciální hladiny miRNA mezi pacienty s léčbou MPH versus bez léčby a mezi pacienty, kteří pokračují, oproti těm, kteří ustoupili z diagnózy ADHD. Bude stanoveno, zda miRNA mohou fungovat jako biomarker, který zobrazuje stav ADHD po léčbě.

4. Předpokládané cílové geny a jejich obohacovací dráhy odlišně exprimovaných miRNA budou získány pomocí TargetScan v6.2, miRWalk a DIANA-microT. Hledání se zaměří výhradně na 3'-UTR oblasti cílových miRNA s p-hodnotou 0,05 definující distribuci pravděpodobnosti náhodných shod nastavených v softwaru s minimální délkou semene miRNA 7.