Epigenetikk ved ADHD

År 1: Rekruttere 100 ADHD-pasienter og 100 friske kontrollpersoner (treningssett) for å utvikle et miRNA-diagnosepanel for ADHD

1. Hundre kvalifiserte ADHD-pasienter som blir behandlet i poliklinisk avdeling for barnepsykiatri ved Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital i Taiwan vil bli rekruttert til denne studien. Hundre alders- og kjønnsmatchede kontrollpersoner vil bli funnet i samme nedslagsfelt som pasientene. Etter å ha innhentet informert samtykke fra sine foreldre eller foresatte, skal forskningspsykiatere intervjue deltakerne ved å bruke K-SADS-E for å bekrefte diagnosen. Deltakerne vil også gjennomgå WISC-IV-vurdering for å utelukke intellektuelle funksjonshemminger.

2. For både ADHD-pasientene og de friske kontrollpersonene vil erfarne barnepsykologer administrere Conners CPT- og Conners CATA-testing i et rom designet for å redusere inkonsekvente testforhold. Foreldre eller foresatte vil bli pålagt å fylle ut SNAP-IV foreldreskjemaet og SAICA; pasientens lærere vil bli pålagt å fylle ut SNAP-IV-lærerskjemaet; og ADHD-RS og CGI vil bli utfylt og vurdert av henholdsvis en barnepsykiater.

3. Venøst ​​blod vil bli samlet inn fra hver deltaker i et EDTA antikoagulasjonsrør. Blodprøvene vil bli viderebehandlet med mirVana miRNA-isolasjonssettet (Life-teknologi) for å trekke ut totalt RNA. Basert på de foreløpige funnene, vil ΔCt-verdiene til de 22 kandidat-miRNA-ene bli bestemt for de 100 ADHD-prøvene og 100 kontrollprøvene. Deretter vil de 10 miRNAene med den minste p-verdien bli valgt for å utvikle et miRNAs diagnosepanel for ADHD det andre året.

4. ADHD-pasientene og friske kontrollpersoner vil ha 12 måneders oppfølging. Behandlingsprosedyrene i løpet av den tiden for pasienter med ADHD vil bli bestemt av pasientens psykiateres tradisjonelle praksis og avtale mellom pasienter og deres foreldre.

1. ADHD-pasienter som bestemmer seg for å motta medisinsk behandling vil bli foreskrevet oral korttidsvirkende MPH (MPH-IR) to eller tre ganger daglig, med hver dose mellom 0,3 og 1,0 mg/kg, som skal bestemmes basert på alvorlighetsgraden av deres kliniske behandling. symptomer, samt deres alder, høyde og kroppsvekt.
2. Doseringen vil bli justert annenhver uke for å forbedre ADHD-symptomer. Endringer i langtidsvirkende MPH (Ritalin-LA) eller metylfenidat med forlenget frigivelse (Concerta) er tillatt avhengig av kliniske krav. Maksimaldosene MPH-IR og Ritalin-LA per dag er 60 mg og Concerta er 54 mg, da dette er de maksimale daglige dosene som er godkjent i Taiwan. Dosen vil reduseres dersom det skulle oppstå klinisk utålelige uønskede tilstander. Den endelige titreringsdosen av MPH med en akseptabel respons vil opprettholdes gjennom oppfølgingsperioden.
3. Samtidig medisinering er forbudt. Overholdelse av legemiddelregimet vil bli verifisert ved hvert besøk basert på rapporter fra pasientenes foreldre og hvor mye av resepten som gjenstår. Pasienter som starter en ny medisin mellom de ulike tidspunktene i studien vil bli ansett som frafall.
4. ADHD-pasientene som bestemmer seg for ikke å motta medisinsk behandling blir vanligvis revurdert av en barnepsykiater i poliklinisk avdeling en gang i måneden og kan få atferdsterapi eller re-edukativ psykoterapi i løpet av studiens varighet.
5. De friske kontrollpersonene vil kun bli vurdert én gang, ved baseline. 5. Pasienter med ADHD vil bli revurdert den tolvte måneden etter baseline. Vurderingsprosedyrene, inkludert miRNA-analyse og ADHD-tiltak, som ble administrert ved baseline vil bli replikert.

År 2: Utvikle en SVM-klassifiseringsmodell og melde inn en uavhengig valideringsgruppe med 50 ADHD-pasienter og 50 friske kontrollpersoner (testsett)

1. Basert på prøvene som allerede er samlet, kan de 10 mest differensielt uttrykte miRNAene mellom ADHD-gruppen og kontrollgruppen bestemmes. Disse 10 verdiene kan brukes til å utlede SVM-klassifiseringsmodellen og lage et pålitelig og sterkt miRNA-diagnosepanel for ADHD. Receiver operating characteristic (ROC) kurver vil bli brukt for å evaluere gyldigheten til dette miRNA-diagnosepanelet. Både spesifisiteten og sensitiviteten til dette panelet forventes å nå 80 %.
2. For den uavhengige valideringsgruppen (Testing Set), vil 50 kvalifiserte pasienter med ADHD og 50 alders- og kjønnsmatchede friske kontrollpersoner rekrutteres. Forskningspsykiatere vil intervjue deltakerne ved å bruke K-SADS-E for å bekrefte diagnosen, og deltakerne vil også gjennomgå WISC-IV-vurdering for å utelukke intellektuelle funksjonshemminger.
3. Alle ADHD-pasienter og friske kontrollpersoner vil ha erfarne barnepsykologer som administrerer Conners CPT og Conners CATA-testing. Foreldrene eller foresatte til deltakerne må fylle ut SNAP-IV-foreldreskjemaet og SAICA; pasientens lærere er pålagt å fylle ut SNAP-IV-lærerskjemaet; og ADHD-RS og CGI vil bli utfylt og vurdert av henholdsvis en barnepsykiater.
4. Venøst ​​blod vil bli samlet inn fra hver deltaker ved hjelp av et EDTA antikoagulantrør. Blodprøvene vil bli viderebehandlet med mirVana miRNA-isolasjonssettet (Life-teknologi) for å trekke ut totalt RNA. Nivåene av de 10 miRNAene valgt for SVM-klassifiseringsmodellen vil bli bestemt av qRT-PCR.
5. For å verifisere resultatene av treningssettet, vil miRNA-dataene til testsettet (både de 50 ADHD-pasientene og de 50 friske kontrollpersonene) brukes til blindtesting av miRNA-diagnosepanelet. Diskrimineringsvaliditeten forventer at både sensitiviteten og spesifisiteten når 80 %.
6. Behandlings- og oppfølgingsprosedyren for ADHD-pasienter vil være den samme som det første året. De 100 ADHD-pasientene som ble rekruttert det første året vil bli fulgt og revurdert

År 3: Fullføring av 12-måneders oppfølging av ADHD-pasienter og utførelse av analyse av målgener og berikelsesveier for miRNAene

1. Det vil ikke bli rekruttert nye deltakere i det tredje året. 12-måneders oppfølging av alle 150 pasienter med ADHD vil bli gjennomført i løpet av dette året.
2. Den andre vurderingen av pasienter med ADHD vil bli utført for å avslutte denne studien (tolvte måned etter baseline). De samme vurderingsprosedyrene som ble administrert ved baseline vil bli replikert.

(1) Blodprøver vil bli samlet inn og behandlet på nytt for å trekke ut miRNA-er. (2) En forskningspsykiater vil intervjue ADHD-pasientene ved å bruke K-SADS-E for å bekrefte at pasientene fortsatt oppfyller de diagnostiske kriteriene for ADHD.

(3) Pasienter med ADHD vil gjennomgå nevropsykologisk testing (WISC-IV, Conners CPT og Conners CATA) og få sine atferdssymptomer vurdert (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS og CGI) av samme vurderer ved baseline. For å unngå skjevheter avledet av medisinering, vil ADHD-pasienter bli bedt om å ikke ta medisinene sine på dagen for den nevropsykologiske vurderingen.

3. Trendene for miRNA-nivåene i løpet av 12-måneders oppfølging vil bli identifisert. De differensielle miRNA-nivåene mellom pasienter med versus uten MPH-behandling og mellom pasienter som fortsetter versus de som remitterer fra ADHD-diagnosen vil bli evaluert. Hvorvidt miRNA kan fungere som en biomarkør som skildrer ADHD-tilstanden etter behandling vil bli bestemt.

4. De forutsagte målgenene og deres berikelsesveier for de differensielt uttrykte miRNAene vil bli oppnådd ved bruk av TargetScan v6.2, miRWalk og DIANA-microT. Søket vil utelukkende fokusere på 3'-UTR-regionene til mål-miRNA-ene med en p-verdi på 0,05 som definerer sannsynlighetsfordelingen for tilfeldige treff satt i programvaren med en minimumslengde på miRNA-frø på 7.