Epigenetika az ADHD-ban

1. év: 100 ADHD-s beteg és 100 egészséges kontroll alany (Training Set) toborzása az ADHD miRNS-diagnosztikai paneljének kidolgozására

1. Száz alkalmas ADHD-beteget, akiket a tajvani Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital Gyermekpszichiátriai Ambuláns Osztályán kezelnek, toboroznak ebbe a tanulmányba. Száz életkorban és nemben egyező kontrollalany található ugyanabban a vonzáskörzetben, mint a betegek. Szüleik vagy gondviselők tájékozott beleegyezését követően a kutató pszichiáterek a K-SADS-E segítségével interjút készítenek a résztvevőkkel a diagnózis megerősítésére. A résztvevők WISC-IV értékelésen is átesnek, hogy kizárják az értelmi fogyatékosságot.

2. Mind az ADHD-betegek, mind az egészséges kontrollalanyok esetében tapasztalt gyermekpszichológusok végzik el a Conners CPT és Conners CATA teszteket egy olyan helyiségben, amelyet úgy alakítottak ki, hogy csökkentsék az inkonzisztens vizsgálati körülményeket. A szülőknek vagy gyámoknak ki kell tölteniük a SNAP-IV szülői űrlapot és a SAICA-t; a betegek tanárainak ki kell tölteniük a SNAP-IV tanári űrlapot; az ADHD-RS-t és a CGI-t pedig egy gyermekpszichiáter fogja kitölteni és minősíteni.

3. Minden résztvevőtől vénás vért vesznek egy EDTA antikoaguláns csőben. A vérmintákat a mirVana miRNS izolációs készlettel (Life technológia) tovább dolgozzák fel az összes RNS kinyerésére. Az előzetes megállapítások alapján a 22 miRNS-jelölt ΔCt értékét a 100 ADHD mintára és a 100 kontrollmintára határozzuk meg. Ezután a 10 legkisebb p-értékű miRNS-t választják ki, hogy a második évben egy miRNS-diagnosztikai panelt dolgozzanak ki ADHD-re.

4. Az ADHD-s betegek és az egészséges kontroll alanyok 12 hónapos követésben részesülnek. Az ADHD-s betegek ez idő alatti kezelési eljárásait a betegek pszichiáterei hagyományos gyakorlata, valamint a betegek és szüleik megállapodása határozza meg.

1. Azoknak az ADHD-betegeknek, akik úgy döntenek, hogy orvosi kezelésben részesülnek, napi kétszer vagy háromszor orális, rövid hatású MPH-t (MPH-IR) írnak fel, mindegyik dózis 0,3 és 1,0 mg/ttkg között van, amelyet klinikai állapotuk súlyossága alapján kell meghatározni. tüneteket, valamint életkorukat, magasságukat és testsúlyukat.
2. Az adagolást kéthetente módosítják az ADHD tüneteinek megfelelő javítása érdekében. A tartós hatású MPH (Ritalin-LA) vagy az elnyújtott felszabadulású metilfenidát (Concerta) módosítása a klinikai követelményektől függően megengedett. Az MPH-IR és a Ritalin-LA maximális napi adagja 60 mg, a Concertaé pedig 54 mg, mivel ezek a Tajvanon engedélyezett maximális napi adagok. Az adagot csökkenteni kell, ha bármilyen klinikailag elviselhetetlen kedvezőtlen állapot jelentkezik. Az elfogadható választ adó MPH végső titrálási dózisa a követési időszak alatt megmarad.
3. Egyidejű gyógyszerek tilosak. A gyógyszeres kezelési rend betartását minden vizit alkalmával ellenőrizni fogják a betegek szüleitől származó jelentések és a felírt recept fennmaradó része alapján. Azok a betegek, akik a vizsgálat különböző időpontjai között új gyógyszert kezdenek, lemorzsolódónak minősülnek.
4. Azon ADHD-s betegeket, akik úgy döntenek, hogy nem kapnak orvosi kezelést, általában havonta egyszer újraértékelik a járóbeteg-osztály gyermekpszichiáterei, és a vizsgálat időtartama alatt viselkedésterápiában vagy átnevelő pszichoterápiában részesülhetnek.
5. Az egészséges kontroll alanyokat csak egyszer, az alapvonalon értékelik. 5. Az ADHD-s betegeket a kiindulási állapotot követő tizenkettedik hónapban újraértékelik. Az értékelési eljárásokat, beleértve a miRNS-elemzést és az ADHD méréseket is, amelyeket az alapvonalon alkalmaztak, megismétlik.

2. év: SVM osztályozási modell kidolgozása és egy független validációs csoport felvétele 50 ADHD-s betegből és 50 egészséges kontroll alanyból (Tesztelőkészlet)

1. A már összegyűjtött minták alapján meghatározható a 10 legkülönbözőbb miRNS az ADHD csoport és a kontrollcsoport között. Ez a 10 érték felhasználható az SVM osztályozási modell levezetésére, és egy megbízható és erős miRNS-diagnosztikai panel létrehozására az ADHD számára. A vevő működési karakterisztikája (ROC) görbéit alkalmazzuk a miRNS diagnosztikai panel érvényességének értékelésére. Ennek a panelnek mind a specificitása, mind az érzékenysége várhatóan eléri a 80%-ot.
2. A független validációs csoportba (Testing Set) 50 alkalmas ADHD-s beteget, valamint 50 életkorban és nemben egyező egészséges kontroll alanyt vesznek fel. A kutató pszichiáterek a K-SADS-E segítségével interjút készítenek a résztvevőkkel a diagnózis megerősítésére, és a résztvevők WISC-IV értékelésen is átesnek az értelmi fogyatékosság kizárása érdekében.
3. Minden ADHD-beteg és egészséges kontroll alany tapasztalt gyermekpszichológusok végzik a Conners-féle CPT- és Conners-CATA-teszteket. A résztvevők szüleinek vagy gondviselőinek ki kell tölteniük a SNAP-IV szülői űrlapot és a SAICA-t; a beteg tanárai kötelesek kitölteni a SNAP-IV tanári űrlapot; az ADHD-RS-t és a CGI-t pedig egy gyermekpszichiáter fogja kitölteni és minősíteni.
4. Minden résztvevőtől vénás vért vesznek EDTA antikoaguláns cső segítségével. A vérmintákat a mirVana miRNS izolációs készlettel (Life technológia) tovább dolgozzák fel az összes RNS kinyerésére. Az SVM osztályozási modellhez kiválasztott 10 miRNS szintjét qRT-PCR határozza meg.
5. A Training Set eredményeinek ellenőrzésére a tesztkészlet miRNS-adatait (mind az 50 ADHD-s beteg, mind az 50 egészséges kontroll alany) használja a miRNS diagnosztikai panel vakteszthez. A diszkrimináció érvényessége azt várja, hogy mind az érzékenység, mind a specificitás elérje a 80%-ot.
6. Az ADHD-s betegek kezelési és követési eljárása ugyanaz lesz, mint az első évben. Az első évben felvett 100 ADHD-beteget nyomon követik és újraértékelik

3. év: Az ADHD-s betegek 12 hónapos követésének befejezése, valamint a célgének és a miRNS-ek dúsítási útvonalainak elemzése

1. A harmadik évben nem vesznek fel új résztvevőket. Mind a 150 ADHD-s beteg 12 hónapos nyomon követése ez év során befejeződik.
2. Az ADHD-s betegek második értékelését a vizsgálat lezárásaként végzik el (a kiindulási állapotot követő tizenkettedik hónapban). Ugyanazok az értékelési eljárások, amelyeket az alapállapotban alkalmaztak, megismétlik.

(1) Vérmintákat gyűjtenek, és újra feldolgozzák a miRNS-ek kivonására. (2) Egy kutató-pszichiáter kikérdezi a K-SADS-E-t használó ADHD-betegeket, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a betegek továbbra is megfelelnek az ADHD diagnosztikai kritériumainak.

(3) Az ADHD-s betegeket neuropszichológiai vizsgálatnak vetik alá (WISC-IV, Conners CPT és Conners CATA), és viselkedési tüneteiket (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS és CGI) ugyanaz a minősítő értékeli a kiinduláskor. A gyógyszeres kezelésből származó torzítás elkerülése érdekében az ADHD-s betegeket figyelmeztetni kell arra, hogy a neuropszichológiai vizsgálat napján ne szedjék gyógyszereiket.

3. A miRNS szintek trendjeit a 12 hónapos követés során azonosítjuk. Értékelni fogják a miRNS-szintek különbségét az MPH-kezelésben részesülő és az MPH-kezelés nélküli betegek, valamint a folytatólagos betegek és az ADHD-diagnózisból kikerült betegek között. Meg fog határozni, hogy a miRNS-ek működhetnek-e biomarkerként, amely bemutatja az ADHD állapotot a kezelés után.

4. A differenciálisan expresszált miRNS-ek megjósolt célgénjeit és feldúsulási útvonalait TargetScan v6.2, miRWalk és DIANA-microT segítségével kapjuk meg. A keresés kizárólag a cél miRNS-ek 3'-UTR régióira összpontosít, amelyek p-értéke 0,05, ami meghatározza a véletlenszerű egyezések valószínűségi eloszlását a szoftverben, legalább 7-es miRNS maghosszúsággal.