多动症的表观遗传学

第 1 年：招募 100 名 ADHD 患者和 100 名健康对照受试者（训练集）以开发用于 ADHD 的 miRNA 诊断组

1. 将招募在台湾高雄长庚纪念医院儿童精神病门诊部接受治疗的 100 名符合条件的 ADHD 患者进行这项研究。 将在与患者相同的集水区发现一百个年龄和性别匹配的对照对象。 在获得父母或监护人的知情同意后，研究精神病学家应使用 K-SADS-E 采访参与者以确认诊断。 参与者还将接受 WISC-IV 评估以排除智力障碍。

2. 对于 ADHD 患者和健康对照受试者，经验丰富的儿童心理学家将在旨在减少不一致测试条件的房间内进行 Conners CPT 和 Conners CATA 测试。 父母或监护人将需要填写 SNAP-IV 父母表格和 SAICA；患者的教师将被要求填写 SNAP-IV 教师表格； ADHD-RS 和 CGI​​ 将分别由儿童精神病医生完成和评级。

3. 每位参与者的静脉血将收集在 EDTA 抗凝管中。 血液样本将使用 mirVana miRNA 分离试剂盒（Life technology）进一步处理以提取总 RNA。 根据初步发现，将确定 100 个 ADHD 样本和 100 个对照样本的 22 个候选 miRNA 的 ΔCt 值。 然后在第二年选择 p 值最小的 10 个 miRNA 来开发 ADHD 的 miRNA 诊断组。

4.对ADHD患者和健康对照者进行为期12个月的随访。 多动症患者在此期间的治疗程序将由患者的精神科医生的传统做法和患者及其父母的同意来确定。

1. 决定接受药物治疗的 ADHD 患者将被处方口服短效 MPH（MPH-IR），每日 2 至 3 次，每次剂量范围为 0.3 至 1.0 mg/kg，根据其临床严重程度确定症状，以及他们的年龄、身高和体重。
2. 每两周调整剂量以适当改善多动症症状。 根据临床要求，允许更改长效 MPH（利他林-LA）或缓释哌醋甲酯（Concerta）。 MPH-IR 和 Ritalin-LA 每天的最大剂量为 60 毫克，Concerta 为 54 毫克，因为这些是台湾批准的最大日剂量。 如果出现任何临床上无法耐受的不利情况，将减少剂量。 在整个随访期间，将维持具有可接受反应的 MPH 的最终滴定剂量。
3. 禁止合并用药。 每次就诊时，将根据患者父母的报告以及剩余的处方量来验证是否遵守药物治疗方案。 在研究的不同时间点之间开始新药物治疗的患者将被视为退出。
4. 决定不接受药物治疗的 ADHD 患者通常每月一次在门诊部接受儿童精神科医生的重新评估，并可能在研究期间接受行为治疗或再教育心理治疗。
5. 健康对照受试者将仅在基线评估一次。 5. 多动症患者将在基线后第十二个月重新评估。 将复制在基线时执行的评估程序，包括 miRNA 分析和 ADHD 测量。

第 2 年：开发 SVM 分类模型并招募一个独立的验证组，其中包含 50 名 ADHD 患者和 50 名健康对照受试者（测试集）

1. 根据已经收集的样本，可以确定 ADHD 组和对照组之间表达差异最大的 10 个 miRNA。 这 10 个值可用于推导 SVM 分类模型，并为 ADHD 创建可靠且强大的 miRNA 诊断组。 接受者操作特征 (ROC) 曲线将用于评估该 miRNA 诊断组的有效性。 该panel的特异性和敏感性均有望达到80%。
2. 对于独立验证组（测试集），将招募 50 名符合条件的 ADHD 患者和 50 名年龄和性别匹配的健康对照受试者。 研究精神病学家将使用 K-SADS-E 采访参与者以确认诊断，参与者还将接受 WISC-IV 评估以排除智力障碍。
3. 所有 ADHD 患者和健康对照受试者都将由经验丰富的儿童心理学家管理 Conners 的 CPT 和 Conners 的 CATA 测试。 参与者的父母或监护人需要填写 SNAP-IV 父母表格和 SAICA；患者的教师需要填写 SNAP-IV 教师表格； ADHD-RS 和 CGI​​ 将分别由儿童精神病医生完成和评级。
4. 将使用 EDTA 抗凝管从每位参与者身上采集静脉血。 血液样本将使用 mirVana miRNA 分离试剂盒（Life technology）进一步处理以提取总 RNA。 为 SVM 分类模型选择的 10 种 miRNA 的水平将由 qRT-PCR 确定。
5. 为了验证训练集的结果，测试集（50名多动症患者和50名健康对照者）的miRNAs数据将被miRNA诊断组用于盲测。 判别效度要求敏感性和特异性均达到80%。
6. 多动症患者的治疗和后续程序将与第一年相同。 第一年招募的 100 名 ADHD 患者将被跟踪和重新评估

第 3 年：完成 ADHD 患者为期 12 个月的随访，并对 miRNA 的靶基因和富集途径进行分析

1. 第三年不再招募新参与者。 今年将完成对所有 150 名 ADHD 患者的 12 个月随访。
2. 将对 ADHD 患者进行第二次评估以结束本研究（基线后第十二个月）。 将复制在基线时执行的相同评估程序。

(1) 收集血样并再次处理以提取 miRNAs-。 (2) 一名研究精神科医生会使用K-SADS-E对多动症患者进行访谈，以确认患者是否仍符合多动症的诊断标准。

(3) ADHD 患者将接受神经心理测试（WISC-IV、Conners CPT 和 Conners CATA），并在基线时由同一评分者对其行为症状进行评分（SNAP-IV、SAICA、ADHD-RS 和 CGI​​）。 为避免药物产生任何偏差，将告知 ADHD 患者在神经心理学评估当天不要​​服用药物。

3. 确定 12 个月随访期间 miRNA 水平的趋势。 将评估接受 MPH 治疗的患者与未接受 MPH 治疗的患者之间以及继续接受 ADHD 诊断的患者与从 ADHD 诊断中缓解的患者之间的差异 miRNA 水平。 miRNA 是否可以作为描述治疗后 ADHD 状况的生物标志物发挥作用尚待确定。

4. 将使用TargetScan v6.2、miRWalk和DIANA-microT获得差异表达miRNA的预测靶基因及其富集途径。 搜索将专注于目标 miRNA 的 3'-UTR 区域，p 值为 0.05，定义软件中设置的随机匹配的概率分布，最小 miRNA 种子长度为 7。