Épigénétique dans le TDAH

Année 1 : Recrutement de 100 patients TDAH et de 100 sujets témoins sains (Training Set) pour développer un panel de diagnostic de miARN pour le TDAH

1. Cent patients TDAH éligibles qui sont traités dans le service ambulatoire de pédopsychiatrie de l'hôpital Kaohsiung Chang Gung Memorial à Taïwan seront recrutés pour cette étude. Cent sujets témoins appariés selon l'âge et le sexe seront retrouvés dans la même zone de chalandise que celle des patients. Après avoir obtenu le consentement éclairé de leurs parents ou tuteurs, les psychiatres de recherche doivent interroger les participants à l'aide du K-SADS-E pour confirmer le diagnostic. Les participants subiront également une évaluation WISC-IV pour exclure les déficiences intellectuelles.

2. Pour les patients atteints de TDAH et les sujets témoins en bonne santé, des psychologues pour enfants expérimentés administreront les tests Conners CPT et Conners CATA dans une salle conçue pour réduire les conditions de test incohérentes. Les parents ou tuteurs devront remplir le formulaire parental SNAP-IV et le SAICA ; les enseignants des patients devront remplir le formulaire d'enseignant SNAP-IV ; et le ADHD-RS et le CGI seront remplis et évalués, respectivement, par un pédopsychiatre.

3. Le sang veineux sera prélevé sur chaque participant dans un tube anticoagulant EDTA. Les échantillons de sang seront ensuite traités avec le kit d'isolement de miARN mirVana (technologie Life) pour extraire les ARN totaux. Sur la base des résultats préliminaires, les valeurs ΔCt des 22 miARN candidats seront déterminées pour les 100 échantillons de TDAH et les 100 échantillons de contrôle. Ensuite, les 10 miARN avec la plus petite valeur p seront choisis pour développer un panel de diagnostic de miARN pour le TDAH en deuxième année.

4. Les patients TDAH et les sujets témoins sains auront 12 mois de suivi. Les procédures de traitement pendant cette période pour les patients atteints de TDAH seront déterminées par la pratique traditionnelle des psychiatres des patients et l'accord des patients et de leurs parents.

1. Les patients atteints de TDAH qui décident de recevoir un traitement médical se verront prescrire du MPH oral à courte durée d'action (MPH-IR) deux ou trois fois par jour, chaque dose étant comprise entre 0,3 et 1,0 mg/kg, qui sera déterminée en fonction de la gravité de leur état clinique. symptômes, ainsi que leur âge, leur taille et leur poids corporel.
2. La posologie sera ajustée toutes les deux semaines pour améliorer correctement les symptômes du TDAH. Les modifications au MPH à action prolongée (Ritalin-LA) ou au méthylphénidate à libération prolongée (Concerta) sont autorisées en fonction des exigences cliniques. Les doses maximales de MPH-IR et de Ritalin-LA par jour sont de 60 mg et de Concerta de 54 mg, car il s'agit des doses quotidiennes maximales approuvées à Taïwan. La dose sera diminuée si des conditions défavorables cliniquement intolérables surviennent. La dose de titration finale de MPH avec une réponse acceptable sera maintenue pendant la période de suivi.
3. Les médicaments concomitants sont interdits. Le respect du régime médicamenteux sera vérifié à chaque visite sur la base des rapports des parents des patients et de la quantité de prescription restante. Les patients qui commencent un nouveau médicament entre les différents moments de l'étude seront considérés comme des abandons.
4. Les patients TDAH qui décident de ne pas recevoir de traitement médical sont généralement réévalués par un pédopsychiatre du service ambulatoire une fois par mois et peuvent bénéficier d'une thérapie comportementale ou d'une psychothérapie rééducative pendant la durée de l'étude.
5. Les sujets témoins sains ne seront évalués qu'une seule fois, au départ. 5. Les patients atteints de TDAH seront réévalués au douzième mois après la ligne de base. Les procédures d'évaluation, y compris l'analyse des miARN et les mesures du TDAH, qui ont été administrées au départ seront reproduites.

Année 2 : Développement d'un modèle de classification SVM et recrutement d'un groupe de validation indépendant avec 50 patients TDAH et 50 sujets témoins sains (Testing Set)

1. Sur la base des échantillons déjà recueillis, les 10 miARN les plus différentiellement exprimés entre le groupe TDAH et le groupe témoin peuvent être déterminés. Ces 10 valeurs peuvent être utilisées pour dériver le modèle de classification SVM et créer un panel de diagnostic de miARN fiable et solide pour le TDAH. Des courbes de caractéristique de fonctionnement du récepteur (ROC) seront appliquées pour évaluer la validité de ce panel de diagnostic de miARN. La spécificité et la sensibilité de ce panel devraient atteindre 80 %.
2. Pour le groupe de validation indépendant (Testing Set), 50 patients éligibles atteints de TDAH et 50 sujets témoins en bonne santé appariés selon l'âge et le sexe seront recrutés. Les psychiatres de recherche interrogeront les participants à l'aide du K-SADS-E pour confirmer le diagnostic, et les participants subiront également une évaluation WISC-IV pour exclure les déficiences intellectuelles.
3. Tous les patients atteints de TDAH et les sujets témoins en bonne santé auront des psychologues pour enfants expérimentés qui administreront les tests CPT et CATA de Conners. Les parents ou tuteurs des participants sont tenus de remplir le formulaire parental SNAP-IV et le SAICA ; les enseignants du patient doivent remplir le formulaire d'enseignant SNAP-IV ; et le ADHD-RS et le CGI seront remplis et évalués, respectivement, par un pédopsychiatre.
4. Le sang veineux sera prélevé sur chaque participant à l'aide d'un tube anticoagulant EDTA. Les échantillons de sang seront ensuite traités avec le kit d'isolement de miARN mirVana (technologie Life) pour extraire les ARN totaux. Les niveaux des 10 miARN élus pour le modèle de classification SVM seront déterminés par qRT-PCR.
5. Pour vérifier les résultats de l'ensemble de formation, les données miARN de l'ensemble de test (à la fois les 50 patients atteints de TDAH et les 50 sujets témoins sains) seront utilisées pour des tests en aveugle par le panel de diagnostic miARN. La validité de la discrimination s'attend à ce que la sensibilité et la spécificité atteignent 80 %.
6. La procédure de traitement et de suivi des patients TDAH sera la même que la première année. Les 100 patients TDAH recrutés la première année seront suivis et réévalués

Année 3 : Achèvement du suivi de 12 mois des patients atteints de TDAH et réalisation d'analyses des gènes cibles et des voies d'enrichissement des miARN

1. Aucun nouveau participant ne sera recruté la troisième année. Le suivi de 12 mois des 150 patients atteints de TDAH sera terminé au cours de cette année.
2. La deuxième évaluation des patients atteints de TDAH sera réalisée pour conclure cette étude (douzième mois après l'inclusion). Les mêmes procédures d'évaluation qui ont été administrées au départ seront reproduites.

(1) Des échantillons de sang seront prélevés et traités à nouveau pour extraire les miARN. (2) Un psychiatre chercheur interrogera les patients atteints de TDAH à l'aide du K-SADS-E afin de confirmer que les patients répondent toujours aux critères de diagnostic du TDAH.

(3) Les patients atteints de TDAH subiront des tests neuropsychologiques (WISC-IV, Conners CPT et Conners CATA) et verront leurs symptômes comportementaux évalués (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS et CGI) par le même évaluateur au départ. Pour éviter tout biais dérivé de la médication, les patients TDAH seront informés de ne pas prendre leurs médicaments le jour de l'évaluation neuropsychologique.

3. Les tendances des niveaux de miARN au cours du suivi de 12 mois seront identifiées. Les niveaux différentiels de miARN entre les patients avec et sans traitement au MPH et entre les patients qui continuent et ceux qui se remettent du diagnostic de TDAH seront évalués. La question de savoir si les miARN peuvent fonctionner comme un biomarqueur qui décrit l'état du TDAH après le traitement sera déterminée.

4. Les gènes cibles prédits et leurs voies d'enrichissement des miARN exprimés de manière différentielle seront obtenus à l'aide de TargetScan v6.2, miRWalk et DIANA-microT. La recherche se concentrera exclusivement sur les régions 3'-UTR des miARN cibles avec une valeur p de 0,05 définissant la distribution de probabilité des correspondances aléatoires définies dans le logiciel avec une longueur minimale de graine de miARN de 7.