Epigenetyka w ADHD

Rok 1: Rekrutacja 100 pacjentów z ADHD i 100 zdrowych osób z grupy kontrolnej (zestaw szkoleniowy) w celu opracowania panelu diagnostycznego miRNA dla ADHD

1. Do tego badania zostanie zrekrutowanych stu kwalifikujących się pacjentów z ADHD, którzy są leczeni w ambulatoryjnym oddziale psychiatrii dziecięcej w Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital na Tajwanie. Sto osób kontrolnych dobranych pod względem wieku i płci znajdzie się w tym samym obszarze zlewni, co pacjenci. Po uzyskaniu świadomej zgody rodziców lub opiekunów, psychiatrzy prowadzący badania przeprowadzają wywiady z uczestnikami za pomocą K-SADS-E w celu potwierdzenia diagnozy. Uczestnicy zostaną również poddani ocenie WISC-IV w celu wykluczenia niepełnosprawności intelektualnej.

2. Zarówno w przypadku pacjentów z ADHD, jak i zdrowych osób z grupy kontrolnej, doświadczeni psycholodzy dziecięcy przeprowadzą testy Conners CPT i Conners CATA w pomieszczeniu zaprojektowanym w celu ograniczenia niespójnych warunków przeprowadzania testów. Rodzice lub opiekunowie będą zobowiązani do wypełnienia formularza dla rodziców SNAP-IV i SAICA; nauczyciele pacjentów będą zobowiązani do wypełnienia formularza nauczyciela SNAP-IV; a ADHD-RS i CGI zostaną odpowiednio uzupełnione i ocenione przez psychiatrę dziecięcego.

3. Od każdego uczestnika zostanie pobrana krew żylna do probówki z antykoagulantem EDTA. Próbki krwi będą dalej przetwarzane za pomocą zestawu do izolacji miRNA mirVana (technologia Life) w celu ekstrakcji całkowitego RNA. Na podstawie wstępnych ustaleń wartości ΔCt 22 kandydujących miRNA zostaną określone dla 100 próbek ADHD i 100 próbek kontrolnych. Następnie 10 miRNA o najmniejszej wartości p zostanie wybranych do opracowania panelu diagnostycznego miRNA dla ADHD w drugim roku.

4. Pacjenci z ADHD i zdrowi uczestnicy kontrolni będą mieli 12-miesięczną obserwację. Procedury leczenia w tym czasie pacjentów z ADHD będą określane na podstawie tradycyjnej praktyki psychiatrów pacjentów oraz zgody pacjentów i ich rodziców.

1. Pacjenci z ADHD, którzy zdecydują się na leczenie, będą przepisywani doustnie krótko działający MPH (MPH-IR) dwa lub trzy razy dziennie, z każdą dawką w zakresie od 0,3 do 1,0 mg/kg, która zostanie określona na podstawie ciężkości ich objawów klinicznych objawów, a także ich wiek, wzrost i masę ciała.
2. Dawka będzie dostosowywana co dwa tygodnie, aby odpowiednio złagodzić objawy ADHD. Zmiany w długo działającym MPH (Ritalin-LA) lub metylofenidacie o przedłużonym uwalnianiu (Concerta) są dozwolone w zależności od wymagań klinicznych. Maksymalne dawki MPH-IR i Ritalin-LA na dzień wynoszą 60 mg, a Concerty 54 mg, ponieważ są to maksymalne dawki dzienne zatwierdzone na Tajwanie. Dawka zostanie zmniejszona, jeśli wystąpią jakiekolwiek objawy niepożądane, których nie można tolerować klinicznie. Ostateczna dostosowana dawka MPH z akceptowalną odpowiedzią zostanie utrzymana przez cały okres obserwacji.
3. Jednoczesne stosowanie leków jest zabronione. Przestrzeganie schematu lekowego będzie weryfikowane na każdej wizycie na podstawie raportów rodziców pacjentów oraz ilości pozostałej recepty. Pacjenci, którzy rozpoczną przyjmowanie nowego leku pomiędzy różnymi punktami czasowymi badania, zostaną uznani za osoby, które nie ukończyły badania.
4. Pacjenci z ADHD, którzy nie decydują się na leczenie farmakologiczne, są zwykle ponownie oceniani przez psychiatrę dziecięcego w oddziale ambulatoryjnym raz w miesiącu i mogą otrzymać terapię behawioralną lub psychoterapię reedukacyjną na czas trwania badania.
5. Zdrowe osoby kontrolne będą oceniane tylko raz, na linii podstawowej. 5. Pacjenci z ADHD zostaną poddani ponownej ocenie w dwunastym miesiącu po punkcie wyjściowym. Procedury oceny, w tym analiza miRNA i pomiary ADHD, które zastosowano na początku badania, zostaną powtórzone.

Rok 2: Opracowanie modelu klasyfikacji SVM i włączenie niezależnej grupy walidacyjnej z 50 pacjentami z ADHD i 50 zdrowymi osobami kontrolnymi (zbiór testowy)

1. Na podstawie już zebranych próbek można określić 10 miRNA o najbardziej zróżnicowanej ekspresji między grupą ADHD a grupą kontrolną. Te 10 wartości można wykorzystać do wyprowadzenia modelu klasyfikacji SVM i stworzenia niezawodnego i silnego panelu diagnostycznego miRNA dla ADHD. Krzywe charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC) zostaną zastosowane do oceny ważności tego panelu diagnostycznego miRNA. Oczekuje się, że zarówno specyficzność, jak i czułość tego panelu sięgną 80%.
2. Do niezależnej grupy walidacyjnej (zbiór testowy) zostanie zrekrutowanych 50 kwalifikujących się pacjentów z ADHD i 50 zdrowych osób kontrolnych dobranych pod względem wieku i płci. Psychiatrzy prowadzący badania przeprowadzą wywiady z uczestnikami za pomocą K-SADS-E w celu potwierdzenia diagnozy, a uczestnicy przejdą również ocenę WISC-IV w celu wykluczenia niepełnosprawności intelektualnej.
3. Wszyscy pacjenci z ADHD i osoby zdrowe z grupy kontrolnej będą mieli doświadczonych psychologów dziecięcych przeprowadzających testy CPT Connersa i CATA Connersa. Rodzice lub opiekunowie uczestników są zobowiązani do wypełnienia formularza dla rodziców SNAP-IV oraz SAICA; nauczyciele pacjenta są zobowiązani do wypełnienia formularza nauczyciela SNAP-IV; a ADHD-RS i CGI zostaną odpowiednio uzupełnione i ocenione przez psychiatrę dziecięcego.
4. Od każdego uczestnika zostanie pobrana krew żylna do probówki z antykoagulantem EDTA. Próbki krwi będą dalej przetwarzane za pomocą zestawu do izolacji miRNA mirVana (technologia Life) w celu ekstrakcji całkowitego RNA. Poziomy 10 miRNA wybranych do modelu klasyfikacyjnego SVM zostaną określone przez qRT-PCR.
5. Aby zweryfikować wyniki zestawu treningowego, dane miRNA z zestawu testowego (zarówno 50 pacjentów z ADHD, jak i 50 zdrowych osób kontrolnych) zostaną wykorzystane do ślepego testowania przez panel diagnostyczny miRNA. Trafność rozróżniania przewiduje, że zarówno czułość, jak i specyficzność osiągną 80%.
6. Procedura leczenia i obserwacji pacjentów z ADHD będzie taka sama jak w pierwszym roku. 100 pacjentów z ADHD zrekrutowanych w pierwszym roku będzie obserwowanych i ponownie ocenianych

Rok 3: Zakończenie 12-miesięcznej obserwacji pacjentów z ADHD i wykonanie analizy docelowych genów i szlaków wzbogacenia miRNA

1. W trzecim roku nie będą przyjmowani nowi uczestnicy. W tym roku zakończy się 12-miesięczna obserwacja wszystkich 150 pacjentów z ADHD.
2. Druga ocena pacjentów z ADHD zostanie przeprowadzona w celu zakończenia tego badania (dwunasty miesiąc po punkcie wyjściowym). Powtórzone zostaną te same procedury oceny, które zastosowano na początku badania.

(1) Próbki krwi zostaną zebrane i ponownie przetworzone w celu ekstrakcji miRNA-. (2) Psychiatra prowadzący badania przeprowadzi wywiad z pacjentami z ADHD za pomocą K-SADS-E w celu potwierdzenia, że ​​pacjenci nadal spełniają kryteria diagnostyczne ADHD.

(3) Pacjenci z ADHD zostaną poddani testom neuropsychologicznym (WISC-IV, Conners CPT i Conners CATA) oraz ocenie objawów behawioralnych (SNAP-IV, SAICA, ADHD-RS i CGI) przez tego samego oceniającego na początku badania. Aby uniknąć uprzedzeń związanych z lekami, pacjenci z ADHD zostaną poinformowani, aby nie przyjmowali leków w dniu oceny neuropsychologicznej.

3. Zidentyfikowane zostaną trendy poziomów miRNA podczas 12-miesięcznej obserwacji. Ocenione zostaną różnice w poziomach miRNA między pacjentami leczonymi i nieleczonymi MPH oraz między pacjentami, którzy kontynuują leczenie a tymi, u których nastąpiła remisja diagnozy ADHD. Ustalone zostanie, czy miRNA mogą funkcjonować jako biomarkery przedstawiające stan ADHD po leczeniu.

4. Przewidywane geny docelowe i ścieżki ich wzbogacenia miRNA o różnej ekspresji zostaną uzyskane przy użyciu TargetScan v6.2, miRWalk i DIANA-microT. Wyszukiwanie skupi się wyłącznie na regionach 3'-UTR docelowych miRNA z wartością p 0,05 określającą rozkład prawdopodobieństwa losowych dopasowań ustawionych w oprogramowaniu z minimalną długością nasion miRNA równą 7.