CPBの持続時間によるDAMPの変化

心臓手術のために手術室に入院した患者の標準的な麻酔モニタリングの後、麻酔科医は、麻酔導入中に不安定な血行動態が予想されるため、少量の局所麻酔薬 (2% リドカイン 1ml) で橈骨動脈に動脈カニューレ挿入を行いました。 この時点で、カニューレ挿入後に導管から空気を除去するために血液を吸引し、少量の血液 (1 ～ 2ml) を採取して EDTA (エチレンジアミン四酢酸二カリウム) 血液検査ボトル (Pre-ANE) に入れます。 ）。

麻酔は、静脈内麻酔薬 (プロポフォール 1 ～ 2mg/kg) と短時間作用型オピオイド鎮痛薬のレミフェンタニル (0.01 ～ 0.1mcg/kg/min) を投与することによって行われます。 その後、神経筋遮断薬と吸入麻酔薬（セボフルラン）を使用して麻酔を維持します。 麻酔方法は、釜山国立大学ヤンサン麻酔科および疼痛医学科の「心臓麻酔プロトコル」に従って同じ方法で実行されます。

麻酔後、活性化凝固時間 (ACT) を測定して、心肺バイパスを使用する前に患者の基礎凝固状態を判断します。 この時、約3mlの動脈血が必要で、さらに1～2mlの血液を採取し、EDTAボトル（Pre-CPB）に保存します。 動静脈のカテーテル挿入後、CPB を適用する場合は、30 分ごとに ABGA (動脈血ガス分析) を行い、患者の状態を監視します。 このとき、必要な血液量は約1mlで、さらに1～2mlの血液を採取してEDTAに保存し、CPB-30min、CPB-60min、CPB-90minなどと標識します。 外科的矯正が完了すると、CPB ウィーニングが実行され、CPB ウィーニングと麻酔終了の間にもう一度 ACT と ABGA が実行されます。 この時点で、さらに 1 ～ 2 ml の動脈血を採取し、EDTA ボトルに保存します (Post-CPB)。 患者が手術後に集中治療室に入室すると、追加の 1 ～ 2ml の血液が収集され、手術の翌日 (Post-OP) に EDTA ボトルに保存されます。

上記の方法で採取された血液は、遠心分離と低温処理により処理されます。 その後、血漿からDNA（デオキシリボ核酸）とPMN（多形核）好中球をQIAmp DNA mini kit（キアゲン、ジャーマンタウンMD）を用いて分離し、RNA（リボ核酸）を精製してcDNA（相補的DNA）を得ます。 定量的リアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (qPCR) を使用して、mtDNA (ミトコンドリア DNA) および IL (インタールキン)-6 遺伝子発現による経時的な DAMP の定量的変化を調査します。