Muutokset DAMP:issa CPB:n keston mukaan

Leikkaussaliin sydänkirurgiaa varten tulleen potilaan tavanomaisen anestesiaseurannan jälkeen anestesiologi suoritti valtimokanyloinnin säteittäiseen valtimoon pienellä määrällä paikallispuudutusainetta (2 % lidokaiinia 1 ml), koska anestesian induktion aikana on odotettavissa epävakaa hemodynamiikka. Tässä vaiheessa veri imetään ilman poistamiseksi putkesta kanyloinnin jälkeen, ja pieni määrä verta (1-2 ml) kerätään ja laitetaan EDTA (Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid di potassium) -veritestipulloon (Pre-ANE). ).

Anestesia suoritetaan antamalla suonensisäistä anestesiaa (propofoli1-2mg/kg) ja lyhytvaikutteista opioidikipulääkettä, remifentaniilia (0,01-0,1 mcg/kg/min). Sen jälkeen anestesiaa ylläpidetään neuromuskulaarisella salpaajalla ja inhalaatioanestesialla (sevofluraania). Anestesiamenetelmä suoritetaan samalla tavalla Yangsanin Pusanin kansallisen yliopiston anestesiologian ja kipulääketieteen laitoksen "sydänanestesian protokollan" mukaisesti.

Anestesian jälkeen aktivoitu hyytymisaika (ACT) mitataan potilaan perushyytymistilan määrittämiseksi, ennen kuin käytetään kardiopulmonaalista ohitusta. Tällä hetkellä tarvitaan noin 3 ml valtimoverinäytettä, ja lisäksi 1-2 ml verta kerätään ja säilytetään EDTA-pullossa (Pre-CPB). Valtimon ja laskimon katetroimisen jälkeen, kun käytetään CPB:tä, ABGA (arterial blood gas analysis) suoritetaan 30 minuutin välein potilaan tilan seuraamiseksi. Tällä hetkellä vaadittu veritilavuus on noin 1 ml, ja lisäksi 1-2 ml verta kerätään ja varastoidaan EDTA:ssa, ja ne on merkitty CPB-30min, CPB-60min, CPB-90min jne. Kun kirurginen korjaus on valmis, CPB-vieroitus suoritetaan ja ACT ja ABGA suoritetaan vielä kerran CPB-vieroituksen ja anestesian päättymisen välillä. Tällä hetkellä kerätään vielä 1-2 ml valtimoverta ja varastoidaan EDTA-pulloon (Post-CPB). Kun potilas saapuu tehohoitoon leikkauksen jälkeen, kerätään vielä 1-2 ml verta ja varastoidaan EDTA-pulloon (Post-OP) seuraavana päivänä leikkauksen jälkeen.

Yllä olevalla menetelmällä kerätty veri käsitellään sentrifugoimalla ja matalassa lämpötilassa. Sen jälkeen DNA (deoksiribonukleiinihappo) ja PMN (polymorfonukleaariset) neutrofiilit eristetään plasmasta käyttämällä QIAmp DNA mini kit (QIAGEN, Germantown MD) ja RNA (ribonukleiinihappo) puhdistusta cDNA:n (komplementaarinen DNA) saamiseksi. Kvantitatiivista reaaliaikaista polymeraasiketjureaktiota (qPCR) käytetään DAMP:iden kvantitatiivisten muutosten tutkimiseen ajan myötä mtDNA:n (mitokondriaalinen DNA) ja IL (interlukiini)-6-geenin ilmentymisen kautta.