Zmiany DAMP w zależności od czasu trwania CPB

Po standardowym monitorowaniu stanu znieczulenia chorego przyjętego na salę operacyjną w celu wykonania zabiegu kardiochirurgicznego, anestezjolog wykonał kaniulację tętnicy promieniowej z użyciem niewielkiej ilości środka miejscowo znieczulającego (2% lidokaina 1 ml), ponieważ podczas indukcji znieczulenia można spodziewać się niestabilnej hemodynamiki. W tym czasie krew jest aspirowana w celu usunięcia powietrza z przewodu po kaniulacji, a niewielka ilość krwi (1-2 ml) jest pobierana i umieszczana w butelce do badania krwi z EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy, dipotas) (Pre-ANE ).

Znieczulenie wykonuje się poprzez podanie dożylnego środka znieczulającego (propofol 1-2mg/kg) oraz krótko działającego opioidowego leku przeciwbólowego remifentanilu (0,01-0,1mcg/kg/min). Następnie znieczulenie podtrzymuje się blokerem przewodnictwa nerwowo-mięśniowego oraz anestetykiem wziewnym (sewofluranem). Metodę znieczulenia przeprowadza się w ten sam sposób zgodnie z „protokołem znieczulenia sercowego” Katedry Anestezjologii i Medycyny Bólu Pusan ​​National University, Yangsan.

Po znieczuleniu mierzy się czas krzepnięcia po aktywacji (ACT) w celu określenia podstawowego stanu krzepnięcia pacjenta przed zastosowaniem krążenia pozaustrojowego. W tym czasie wymagane jest około 3 ml próbki krwi tętniczej, a dodatkowe 1-2 ml krwi jest pobierane i przechowywane w butelce EDTA (Pre-CPB). Po cewnikowaniu tętnicy i żyły, przy zastosowaniu CPB, co 30 minut wykonuje się ABGA (gazometrię krwi tętniczej) w celu monitorowania stanu pacjenta. W tym czasie wymagana objętość krwi wynosi około 1 ml, a dodatkowe 1-2 ml krwi jest pobierane i przechowywane w EDTA i oznaczane CPB-30min, CPB-60min, CPB-90min itp. Po zakończeniu korekcji chirurgicznej przeprowadza się odstawienie CPB, a pomiędzy odstawieniem CPB a zakończeniem znieczulenia ponownie wykonuje się ACT i ABGA. W tym czasie pobiera się dodatkowe 1-2 ml krwi tętniczej i przechowuje w butelce z EDTA (Post-CPB). Kiedy pacjent po operacji trafia na oddział intensywnej terapii, pobiera się dodatkowe 1-2 ml krwi i przechowuje w butelce z EDTA (Post-OP) następnego dnia po operacji.

Krew pobraną powyższą metodą poddaje się obróbce przez odwirowanie i obróbkę w niskiej temperaturze. Następnie DNA (kwas dezoksyrybonukleinowy) i neutrofile PMN (polimorfojądrowe) są izolowane z osocza za pomocą minizestawu QIAmp DNA (QIAGEN, Germantown MD) i oczyszczania RNA (kwasu rybonukleinowego) w celu uzyskania cDNA (komplementarnego DNA). Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR) jest wykorzystywana do badania ilościowych zmian DAMP w czasie poprzez ekspresję genów mtDNA (mitochondrialnego DNA) i IL (interlukiny)-6.