Změny v DAMP podle trvání CPB

Po standardním anesteziologickém monitorování pacienta přijatého na kardiochirurgický operační sál provedl anesteziolog arteriální kanylaci na a. radialis malým množstvím lokálního anestetika (2% lidokain 1ml), protože při úvodu do anestezie lze očekávat nestabilní hemodynamiku. V tomto okamžiku se krev odsaje, aby se odstranil vzduch z konduitu po kanylaci, malé množství krve (1-2 ml) se odebere a umístí do EDTA (Ethylene Diamin Tetra Acet Acid di draselný) krevní testovací lahvičky (Pre-ANE ).

Anestezie se provádí intravenózním podáním anestetika (propofol 1-2 mg/kg) a krátkodobě působícího opioidního analgetika, remifentanilu (0,01-0,1 mcg/kg/min). Poté se anestezie udržuje pomocí neuromuskulárního blokátoru a inhalačního anestetika (sevofluran). Anesteziologická metoda se provádí stejným způsobem podle „protokolu srdeční anestezie“ Kliniky anesteziologie a bolesti, Pusan ​​National University, Yangsan.

Po anestezii se před použitím kardiopulmonálního bypassu měří aktivovaný čas srážení (ACT), aby se určil stav bazální srážlivosti pacienta. V této době jsou potřeba asi 3 ml vzorku arteriální krve a další 1-2 ml krve se odeberou a skladují v EDTA lahvičce (Pre-CPB). Po katetrizaci tepny a žíly, když je aplikována CPB, se každých 30 minut provádí ABGA (analýza arteriálních krevních plynů), aby se monitoroval stav pacienta. V tuto chvíli je požadovaný objem krve asi 1 ml a další 1-2 ml krve se odebere a uloží do EDTA a označí se CPB-30min, CPB-60min, CPB-90min atd. Po dokončení chirurgické korekce se provede odstavení CPB a mezi odstavením CPB a koncem anestezie se ještě jednou provedou ACT a ABGA. V tomto okamžiku se odeberou další 1-2 ml arteriální krve a uloží se do EDTA lahvičky (Post-CPB). Když je pacient po operaci přijat na jednotku intenzivní péče, další den po operaci se odebere další 1-2 ml krve a uloží se do lahvičky s EDTA (Post-OP).

Krev odebraná výše uvedeným způsobem se zpracuje centrifugací a zpracováním při nízké teplotě. Poté jsou z plazmy izolovány neutrofily DNA (deoxyribonukleová kyselina) a PMN (polymorfonukleární) pomocí mini sady QIAmp DNA (QIAGEN, Germantown MD) a purifikace RNA (ribonukleová kyselina) pro získání cDNA (komplementární DNA). Kvantitativní polymerázová řetězová reakce v reálném čase (qPCR) se používá ke zkoumání kvantitativních změn v DAMP v průběhu času prostřednictvím exprese genu mtDNA (mitochondriální DNA) a IL (interlukin)-6.