Изменения DAMP в зависимости от продолжительности ИК

После стандартного анестезиологического контроля пациента, поступившего в операционную для проведения кардиохирургических операций, анестезиологом была проведена артериальная канюляция на лучевой артерии с небольшим количеством местного анестетика (2% лидокаин 1 мл), так как при индукции анестезии можно ожидать нестабильной гемодинамики. В это время кровь аспирируют для удаления воздуха из канала после канюляции, собирают небольшое количество крови (1-2 мл) и помещают в бутылку для анализа крови с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислотой и калием) (Pre-ANE). ).

Анестезия проводится путем внутривенного введения анестетика (пропофол 1–2 мг/кг) и опиоидного анальгетика короткого действия ремифентанила (0,01–0,1 мкг/кг/мин). После этого анестезию поддерживают с помощью миорелаксанта и ингаляционного анестетика (севофлюран). Метод анестезии осуществляется таким же образом в соответствии с «протоколом сердечной анестезии» кафедры анестезиологии и медицины боли Пусанского национального университета, Янсан.

После анестезии измеряют активированное время свертывания крови (АСТ) для определения базального статуса свертывания крови пациента перед использованием искусственного кровообращения. В это время требуется около 3 мл образца артериальной крови, дополнительно 1-2 мл крови собирают и хранят во флаконе с ЭДТА (Pre-CPB). После катетеризации артерии и вены, при применении ИК, каждые 30 минут проводят АБГА (анализ газов артериальной крови) для наблюдения за состоянием пациента. В это время необходимый объем крови составляет около 1 мл, а дополнительные 1-2 мл крови собираются и хранятся в ЭДТА, и они маркируются CPB-30min, CPB-60min, CPB-90min и т. д. Когда хирургическая коррекция завершена, выполняется отлучение от аппарата искусственного кровообращения, а между отлучением от аппарата искусственного кровообращения и окончанием анестезии еще раз выполняются АКТ и АБГА. В это время собирают дополнительно 1-2 мл артериальной крови и хранят во флаконе с ЭДТА (после ИК). Когда пациент поступает в отделение интенсивной терапии после операции, дополнительно берут 1-2 мл крови и хранят ее во флаконе с ЭДТА (после операции) на следующий день после операции.

Кровь, собранную вышеуказанным способом, обрабатывают центрифугированием и низкотемпературной обработкой. После этого из плазмы выделяют ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту) и PMN (полиморфноядерные) нейтрофилы с использованием мини-набора QIAmp DNA (QIAGEN, Germantown MD) и очистку РНК (рибонуклеиновая кислота) для получения кДНК (комплементарной ДНК). Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени (qPCR) используется для исследования количественных изменений DAMP с течением времени посредством экспрессии мтДНК (митохондриальная ДНК) и IL (интерлукин)-6.