Cambiamenti nei DAMP in base alla durata del CPB

Dopo il monitoraggio anestetico standard del paziente ricoverato in sala operatoria per cardiochirurgia, l'anestesista ha eseguito l'incannulamento arterioso dell'arteria radiale con una piccola quantità di anestetico locale (lidocaina al 2% 1 ml) perché durante l'induzione dell'anestesia ci si può aspettare un'emodinamica instabile. A questo punto, il sangue viene aspirato per rimuovere l'aria dal condotto dopo l'incannulamento, una piccola quantità di sangue (1-2 ml) viene raccolta e posta in un flacone per analisi del sangue EDTA (Ethylene Diamine Tetra acetic Acid di potassio) (Pre-ANE ).

L'anestesia viene eseguita somministrando un anestetico per via endovenosa (propofol 1-2 mg/kg) e un analgesico oppioide a breve durata d'azione, remifentanil (0,01-0,1 mcg/kg/min). Successivamente, l'anestesia viene mantenuta utilizzando un bloccante neuromuscolare e un anestetico per inalazione (sevoflurano). Il metodo di anestesia viene eseguito allo stesso modo secondo il "protocollo di anestesia cardiaca" del Dipartimento di Anestesiologia e Medicina del Dolore, Università Nazionale di Pusan, Yangsan.

Dopo l'anestesia, il tempo di coagulazione attivato (ACT) viene misurato per determinare lo stato di coagulazione basale del paziente prima che venga utilizzato il bypass cardiopolmonare. A questo punto, sono necessari circa 3 ml di campione di sangue arterioso e altri 1-2 ml di sangue vengono raccolti e conservati in un flacone EDTA (Pre-CPB). Dopo la cateterizzazione dell'arteria e della vena, quando viene applicato il CPB, l'ABGA (emogasanalisi arteriosa) viene eseguita ogni 30 minuti per monitorare le condizioni del paziente. In questo momento, il volume di sangue richiesto è di circa 1 ml e altri 1-2 ml di sangue vengono raccolti e conservati in EDTA e sono etichettati con CPB-30min, CPB-60min, CPB-90min, ecc. Quando la correzione chirurgica è completata, viene eseguito lo svezzamento del CPB e l'ACT e l'ABGA vengono eseguiti ancora una volta tra lo svezzamento del CPB e la fine dell'anestesia. A questo punto, vengono raccolti altri 1-2 ml di sangue arterioso e conservati in un flacone EDTA (Post-CPB). Quando un paziente viene ricoverato nell'unità di terapia intensiva dopo l'intervento chirurgico, vengono raccolti ulteriori 1-2 ml di sangue e conservati nel flacone di EDTA (Post-OP) il giorno successivo all'intervento.

Il sangue raccolto con il metodo di cui sopra viene elaborato mediante centrifugazione e trattamento a bassa temperatura. Successivamente, i neutrofili DNA (acido desossiribonucleico) e PMN (polimorfonucleato) vengono isolati dal plasma utilizzando il mini kit QIAmp DNA (QIAGEN, Germantown MD) e la purificazione dell'RNA (acido ribonucleico) per ottenere cDNA (DNA complementare). La reazione quantitativa a catena della polimerasi in tempo reale (qPCR) viene utilizzata per studiare i cambiamenti quantitativi nei DAMP nel tempo attraverso l'espressione del gene mtDNA (DNA mitocondriale) e IL (interluchina)-6.