新たに診断された急性リンパ芽球性白血病の青年におけるABCB1およびAMPK発現に対するメトホルミンの影響

急性リンパ芽球性白血病は、小児および青年に最も多い癌です。 現在、化学療法剤の併用により、患者の 90% 以上で寛解が達成されています。 しかし、思春期の若者は子供に比べて予後が悪い。

複数の薬剤耐性遺伝子は、さまざまな癌で耐性を引き起こすことがよく知られており、これらの遺伝子の中で最も重要なものは ABCB 遺伝子ファミリー、特に ABCB1 です。 この耐性は、急性リンパ芽球性白血病でも報告されています。 また、AMPK (アデノシン三リン酸) 遺伝子発現の変化は、細胞内の抗腫瘍効果に関連しています。

ビグアニドであるメトホルミンは、AMPK の活性化、および ABCB1 遺伝子の産物である糖タンパク質 P の遮断によって細胞内 ATP レベルを低下させることが実証されています。 多くの報告で、さまざまな種類のがんに対するメトホルミンの効果が説明されていました。 成人では、メトホルミンの使用は、低 ABCB1/MDR1 (多剤耐性 1) 発現および高 AMPK 発現に関連して、全体および無イベント生存を改善するのに有用であることが実証されています。

研究者らは、新たに急性リンパ芽球性白血病と診断された青年の寛解導入期に、メトホルミンが ABCB1/MDR1 および AMPK に何らかの影響を与えるかどうかを提案しています。

仮説：新たに急性リンパ芽球性白血病と診断されたメキシコの青年の寛解導入中にメトホルミンが標準的な化学療法に追加された場合、ABCB1遺伝子のmRNA（メッセンジャーリボ核酸）発現レベルは減少し、AMPK遺伝子発現は終了時に増加します.寛解誘導。

この研究は、急性リンパ芽球性白血病と新たに診断された青年の寛解導入中の ABCB1 および AMPK 遺伝子の発現の変更における、標準的な化学療法レジメンへのメトホルミンの追加の効果を評価するふりをしています。

また、健康な青年および急性リンパ芽球性白血病と診断された青年の ABCB1 および AMPK の発現レベルについても説明します。 診断時と寛解導入終了時のこれらの遺伝子の発現レベルを比較します。そして、これらの遺伝子の初期発現とメトホルミンの使用に基づいて、グローバルおよびイベントフリーの生存率を比較します。

研究者らは、従来の化学療法を受けている患者と、従来の化学療法とメトホルミン 1000 mgm2SC/日を投与されている患者の青年における ABCB1 および AMPK 遺伝子の発現の変化を、新たに診断された急性リンパ芽球性白血病と比較する無作為化公開臨床試験を提案しました。処理。

10歳から21歳までの新しい急性リンパ芽球性白血病のすべての患者は、インフォームドコンセントが承認された状態で参加するよう招待されています。 除外基準には、以前にステロイドまたは他の化学療法を使用した患者、およびダウン症の患者が含まれます。

調査員は、各グループに 10 人の患者を登録するふりをします。 急性リンパ芽球性白血病の形態学的および血球計算診断の確認後、青年は、患者および法的に認可された代表者によって署名されたインフォームドコンセントに参加するよう招待されます。

サンプルは末梢血の単核細胞から得られ、全ＲＮＡ（リボ核酸）はＴＲＩｚｏｌ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって得られる。 核酸の完全性と純度は、分光測光法によって決定されます。 RNA は、必要になるまで -80ºC で凍結されます。 DNAc (相補的デオキシリボ核酸) 合成は、2 マイクログラムの RNA、オリゴヌクレオチド、dNTP、バッファー、MgCl2、KCl (塩化カリウム)、および DTT (ジチオスレイトール) から行われ、20 マイクログラムの最終容量が得られます。 混合物を 37ºC で 2 分間、1 マイクロリットルの逆転写酵素でインキュベートし、37ºC で 50 分間インキュベートします。 遺伝子の qRT-PCR (定量的リアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応) は、遺伝子発現アッセイ TaqMan® を使用して行われます。 発現レベルは、2-デルタ-デルタ-Ct メソッドを使用して計算されます。

寛解導入化学療法には、7 日間のプレドニゾン 60 mgm2SCD のステロイド前段階が含まれます。 適切な寛解導入期は、プレドニゾン 60 mgm2 を 0 日目から 28 日目まで毎日服用することです。 0、7、14、21日目にビンクリスチン1.5mgm2; 0、7、21日目にドキソルビシン25mgm2; 2、4、6、8、10、および 12 日目に L-アスパラギナーゼ 10,000 Um2。22、25、および 29 日目にエトポシド 300mgm2 およびシタラビン 300mgm2。 髄腔内化学療法は、0、7、14、および 21 日目に投与されます。 寛解導入スキームの後、形態を評価するために骨髄吸引が行われ、報告されたリンパ芽球が 5% 未満の場合、患者は高用量のメトトレキサートと 6 メルカプトプリンによる地固め段階に進み、その後、プロトコル。

中間変数は、0日目の末梢芽球数、14日目および誘導終了時および誘導MRD終了時の骨髄の形態学的検査(最小残存病変)である。

メトホルミンは、-7日目から寛解導入期間の終わりまで、1日3回、最大用量850mgで、1日あたり1000mgm2の用量で無作為化により実験群に投与されます。 遺伝子ＡＢＣＢ１およびＡＭＰＫの発現を決定するための末梢血サンプルの調達は、－７日目および寛解誘導の終わりに行われる。 患者のフォローアップは、グローバルおよびイベントフリー生存を計算するために行われます。