二甲双胍对初诊急性淋巴细胞白血病青少年ABCB1和AMPK表达的影响

急性淋巴细胞白血病是儿童和青少年中最常见的癌症。 目前，联合化疗药物可使90%以上的患者达到缓解。 但是，与儿童相比，青少年的预后较差。

多种耐药基因是众所周知的导致不同癌症产生耐药性的基因，其中最重要的是ABCB基因家族，特别是ABCB1。 在急性淋巴细胞白血病中也报道了这种耐药性。 AMPK（三磷酸腺苷）基因表达的变化也与细胞内的抗肿瘤作用有关。

二甲双胍是一种双胍，已证明可通过激活 AMPK 和阻断 ABCB1 基因的产物糖蛋白 P 来降低细胞内 ATP 水平。 许多报告描述了二甲双胍对不同癌症类型的影响。 在成人中，二甲双胍的使用已证明有助于改善总体和无事件生存，这与低 ABCB1/MDR1（多药耐药性 1）表达和高 AMPK 表达有关。

研究人员提出二甲双胍是否对新诊断为急性淋巴细胞白血病的青少年在缓解诱导期的 ABCB1/MDR1 和 AMPK 有任何影响。

假设：如果在墨西哥初诊急性淋巴细胞白血病青少年的缓解诱导期间将二甲双胍添加到标准化疗中，那么 ABCB1 基因的 mRNA（信使核糖核酸）表达水平将降低，而 AMPK 基因表达将在结束时增加缓解诱导。

本研究旨在评估在新诊断患有急性淋巴细胞白血病的青少年的缓解诱导过程中，将二甲双胍添加到标准化疗方案中对 ABCB1 和 AMPK 基因表达的改变的影响。

还描述了健康青少年和被诊断患有急性淋巴细胞白血病的青少年的 ABCB1 和 AMPK 的表达水平。 比较这些基因在诊断时和缓解诱导结束时的表达水平；并根据这些基因的初始表达和二甲双胍的使用来比较全局和无事件生存。

研究人员提出了一项随机开放临床试验，以比较接受常规化疗与常规化疗加二甲双胍 1000 mgm2SC 的青少年新诊断急性淋巴细胞白血病患者在缓解诱导期期间 ABCB1 和 AMPK 基因表达的改变。治疗。

所有年龄在 10 至 21 岁之间的新发急性淋巴细胞白血病患者均受邀参加，并获得知情同意。 排除标准包括以前使用过类固醇或其他化疗的患者，以及患有唐氏综合症的患者。

研究人员假装为每组招募 10 名患者。 在急性淋巴细胞白血病的形态学和细胞学诊断确认后，在患者和合法授权代表签署知情同意书的情况下，邀请青少年参加。

样本取自外周血的单核细胞，总 RNA（核糖核酸）由 TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies) 获得。 核酸的完整性和纯度通过分光光度法确定。 RNA 在-80ºC 下冷冻直至需要。 DNAc（互补脱氧核糖核酸）合成由 2 微克 RNA、寡核苷酸、dNTP、缓冲液、MgCl2、KCl（氯化钾）和 DTT（二硫苏糖醇）组成，最终体积为 20 微克。 将混合物在 37ºC 下孵育 2 分钟，加入 1 微升逆转录酶，并在 37ºC 下孵育 50 分钟。 基因的 qRT-PCR（定量实时聚合酶链式反应）是使用基因表达测定 TaqMan® 进行的。 使用 2-delta-delta-Ct 方法计算表达水平。

缓解诱导化疗包括 7 天泼尼松 60 mgm2SCD 的类固醇前期。 适当的缓解诱导阶段包括从第 0 天到第 28 天每天 60 mgm2 泼尼松；第 0、7、14 和 21 天长春新碱 1.5mgm2；第 0、7、21 天阿霉素 25mgm2； L-天冬酰胺酶 10、000 Um2，第 2、4、6、8、10 和 12 天。依托泊苷 300mgm2 和阿糖胞苷 300mgm2，第 22、25 和 29 天。 在第 0、7、14 和 21 天进行鞘内化疗。 缓解诱导方案后，进行骨髓穿刺评估形态学，如果淋巴原始细胞小于5%，则患者继续巩固阶段，使用高剂量甲氨蝶呤和6-巯基嘌呤，然后进入维持阶段直至治疗结束。协议。

中间变量是第 0 天的外周原始细胞计数、第 14 天和诱导结束时的骨髓形态学检查以及诱导结束时的 MRD（微小残留病）。

从第-7天到缓解诱导期结束，将以每天1000mgm2的剂量随机给予实验组二甲双胍，最大剂量为850mg，每天三次。 将在第-7 天和缓解诱导结束时获取外周血样本以确定基因 ABCB1 和 AMPK 的表达。 将对患者进行随访以计算总体和无事件生存期。