A metformin hatása az ABCB1 és az AMPK expressziójára újonnan diagnosztizált akut limfoblasztos leukémiában szenvedő serdülőknél

Az akut limfoblasztos leukémia a leggyakoribb rákbetegség gyermekek és serdülők körében. Mára a kemoterápiás szerek kombinációja a betegek több mint 90%-ában remissziót eredményez. A serdülőknek azonban kedvezőtlen a prognózisa a gyermekekéhez képest.

A többszörös gyógyszerrezisztens gének jól ismertek a különböző rákos megbetegedések rezisztenciáját okozó gének, amelyek közül a legfontosabbak az ABCB géncsalád, különösen az ABCB1. Ezt a rezisztenciát akut limfoblaszt leukémiában is beszámolták. Szintén az AMPK (adenozin-trifoszfát) génexpressziójának változásai a sejten belüli daganatellenes hatásokkal függenek össze.

A metformin, egy biguanid kimutatta, hogy csökkenti az intracelluláris ATP-szintet az AMPK aktiválása és az ABCB1 gén termékének, a glikoprotein P blokkolásának köszönhetően. Számos jelentés leírta a metformin hatását különböző ráktípusokra. Felnőtteknél a metformin alkalmazása hasznosnak bizonyult az általános és eseménymentes túlélés javításában, az alacsony ABCB1/MDR1 (multidrug rezisztencia 1) expressziójával és a magas AMPK expressziójával összefüggésben.

A kutatók azt javasolják, hogy a metformin hatással van-e az ABCB1/MDR1-re és az AMPK-ra az újonnan diagnosztizált akut limfoblasztos leukémiában szenvedő serdülők remissziós fázisában.

Hipotézis: Ha újonnan diagnosztizált akut limfoblasztos leukémiában szenvedő mexikói serdülőknél metformint adnak a standard kemoterápiához a remisszió indukciója során, akkor az ABCB1 gén mRNS (messenger ribonucleid sav) expressziós szintje csökken, és az AMPK gén expressziója nő a kezelés végén. remisszió indukció.

Ez a tanulmány úgy tesz, mintha értékelné a metformin standard kemoterápiás kezeléshez való hozzáadásának hatását az ABCB1 és AMPK gének expressziójának módosítására az újonnan diagnosztizált akut limfoblasztos leukémiában szenvedő serdülők remissziós indukciója során.

Az ABCB1 és AMPK expressziós szintjének leírására egészséges serdülőknél és akut limfoblaszt leukémiában diagnosztizáltaknál is. Hasonlítsa össze e gének expressziós szintjét a diagnóziskor és a remissziós indukció végén; és összehasonlítani a globális és eseménymentes túlélést ezen gének kezdeti expressziója és a metformin alkalmazása alapján.

A kutatók randomizált, nyílt klinikai vizsgálatot javasoltak az ABCB1 és AMPK gének expressziójának módosulásának összehasonlítására újonnan diagnosztizált akut limfoblasztos leukémiában szenvedő serdülőkben a hagyományos kemoterápiában részesülő betegeknél a hagyományos kemoterápiával és napi 1000 mgm2SC metforminnal a remisszió indukciós szakaszában. kezelés.

Minden 10 és 21 év közötti, új akut limfoblasztos leukémiában szenvedő beteget felkérnek a részvételre, tájékoztatáson alapuló beleegyezéssel. A kizárási kritériumok közé tartoznak azok a betegek, akik korábban szteroidot vagy más kemoterápiát alkalmaztak, valamint a Down-szindrómás betegek.

A vizsgálók úgy tesznek, mintha minden csoportba 10 beteget vonnának be. Az akut limfoblasztos leukémia morfológiai és citometriai diagnózisának megerősítése után a serdülők a betegek és a törvényes képviselője által aláírt, tájékozott beleegyezéssel várják a részvételt.

A mintákat a perifériás vérből származó mononukleáris sejtekből, a teljes RNS-t (Ribonuceid sav) a TRIzol® (Invitrogen® Life Technologies) szerzi be. A nukleinsav integritását és tisztaságát spektrofotometriával határozzuk meg. Az RNS-t -80 °C-on lefagyasztjuk, amíg szükséges. A DNSc (komplementer dezoxiribonukleinsav) szintézis 2 mikrogramm RNS-ből, oligonukleotidokból, dNTP-kből, pufferből, MgCl2-ből, KCl-ből (kálium-klorid) és DTT-ből (ditiotreitol) készül, hogy 20 mikrogramm végső térfogatot kapjunk. A keveréket 37 °C-on 2 percig inkubáljuk 1 mikroliter inverz transzkriptázzal, majd 50 percig 37 °C-on. A gének qRT-PCR-jét (kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakció) a TaqMan® génexpressziós vizsgálattal végezzük. Az expressziós szinteket a 2-delta-delta-Ct módszerrel számítjuk ki.

A remissziós indukciós kemoterápia egy szteroid előfázisból áll, 7 napig 60 mgm2SCD prednizonnal. A megfelelő remisszió-indukciós fázis napi 60 mgm2 prednizonból áll a 0. és 28. nap között; Vincristine 1,5 mgm2 a 0., 7., 14. és 21. napon; Doxorubicin 25mgm2 a 0., 7., 21. napon; L-aszparagináz 10 000 Um2 a 2., 4., 6., 8., 10. és 12. napon. Etopozid 300mgm2 és citarabin 300mgm2 a 22., 25. és 29. napon. Az intratekális kemoterápiát a 0., 7., 14. és 21. napon adják be. A remissziós indukciós séma után csontvelő-aspirációt végzünk a morfológia értékelésére, ha 5%-nál kevesebb lymphoid blaszt jelentenek, a betegek folytatják a konszolidációs fázist nagy dózisú metotrexáttal és 6 merkaptopurinnal, majd ezt követően a fenntartó fázist a kezelés végéig. a protokoll.

A közbenső változók a perifériás blasztszám a 0. napon, a csontvelő morfológiai vizsgálata a 14. napon, valamint az indukció végén és az indukció végén az MRD (minimális reziduális betegség).

A metformint véletlen besorolás útján adják be a kísérleti csoportnak napi 1000mgm2 dózisban, a maximális adag 850mg naponta háromszor, a -7. naptól a remissziós indukciós időszak végéig. A perifériás vérminták gyűjtése az ABCB1 és AMPK gének expressziójának meghatározásához a -7. napon és a remissziós indukció végén történik. A beteg nyomon követése a globális és eseménymentes túlélés kiszámítása érdekében történik.