Wpływ metforminy na ekspresję ABCB1 i AMPK u młodzieży z nowo rozpoznaną ostrą białaczką limfoblastyczną

Ostra białaczka limfoblastyczna jest najczęstszym nowotworem złośliwym u dzieci i młodzieży. Obecnie kombinacja chemioterapeutyków pozwala osiągnąć remisję u ponad 90% pacjentów. Ale nastolatki mają niekorzystne rokowanie w porównaniu z dziećmi.

Wiele genów oporności na leki jest dobrze znanych jako przyczyna oporności w różnych nowotworach, najważniejszym z tych genów jest rodzina genów ABCB, szczególnie ABCB1. Ta oporność jest również opisywana w ostrej białaczce limfoblastycznej. Również zmiany w ekspresji genu AMPK (trifosforanu adenozyny) są związane z działaniem przeciwnowotworowym w komórce.

Wykazano, że metformina, biguanid, zmniejsza wewnątrzkomórkowe poziomy ATP poprzez aktywację AMPK i blokadę glikoproteiny P, produktu genu ABCB1. Wiele raportów opisywało wpływ metforminy na różne typy raka. Wykazano, że u dorosłych stosowanie metforminy poprawia przeżycie całkowite i wolne od zdarzeń, związane z niską ekspresją ABCB1/MDR1 (oporność wielolekowa 1) i wysoką ekspresją AMPK.

Badacze proponują, czy metformina ma jakikolwiek wpływ na ABCB1/MDR1 i AMPK podczas fazy indukcji remisji u młodzieży z nowo rozpoznaną ostrą białaczką limfoblastyczną.

Hipoteza: Jeśli metformina zostanie dodana do standardowej chemioterapii podczas indukcji remisji u meksykańskiej młodzieży z nowo rozpoznaną ostrą białaczką limfoblastyczną, to poziom ekspresji mRNA (messenger rybonukleid acid) genu ABCB1 zmniejszy się, a ekspresja genu AMPK wzrośnie pod koniec indukcja remisji.

Niniejsze badanie ma na celu ocenę wpływu dodania metforminy do standardowego schematu chemioterapii na modyfikację ekspresji genów ABCB1 i AMPK podczas indukcji remisji u młodzieży z nowo rozpoznaną ostrą białaczką limfoblastyczną.

Również w celu opisania poziomów ekspresji ABCB1 i AMPK u zdrowych nastolatków i osób, u których zdiagnozowano ostrą białaczkę limfoblastyczną. Porównaj poziom ekspresji tych genów w momencie diagnozy i pod koniec indukcji remisji; oraz porównanie przeżycia całkowitego i wolnego od zdarzeń w oparciu o początkową ekspresję tych genów i zastosowanie metforminy.

Badacze zaproponowali randomizowane otwarte badanie kliniczne w celu porównania modyfikacji ekspresji genów ABCB1 i AMPK u młodzieży z nowo rozpoznaną ostrą białaczką limfoblastyczną u pacjentów otrzymujących konwencjonalną chemioterapię w porównaniu z konwencjonalną chemioterapią plus metforminą 1000 mgm2sc dziennie podczas fazy indukcji remisji choroby. leczenie.

Do udziału zaproszeni są wszyscy pacjenci z nową ostrą białaczką limfoblastyczną w wieku od 10 do 21 lat, pod warunkiem uzyskania świadomej zgody. Kryteria wykluczenia obejmują pacjentów po wcześniejszym stosowaniu sterydów lub innej chemioterapii oraz pacjentów z zespołem Downa.

Badacze udają, że rejestrują 10 pacjentów do każdej grupy. Po potwierdzeniu diagnozy morfologicznej i cytometrycznej ostrej białaczki limfoblastycznej młodzież jest zaproszona do udziału za świadomą zgodą podpisaną przez pacjentów i przedstawiciela ustawowego.

Próbki uzyskuje się z komórek jednojądrzastych z krwi obwodowej, całkowity RNA (kwas rybonuceidowy) otrzymuje się za pomocą TRIzol ® (Invitrogen® Life Technologies). Integralność i czystość kwasu nukleinowego określa się za pomocą spektrofotometrii. RNA zamraża się w temperaturze -80ºC do czasu, gdy będzie potrzebne. Syntezę DNAc (komplementarnego kwasu dezoksyrybonukleinowego) przeprowadza się z 2 mikrogramów RNA, dodaje się oligonukleotydy, dNTP, bufor, MgCl2, KCl (chlorek potasu) i DTT (ditiotreitol), aby uzyskać końcową objętość 20 mikrogramów. Mieszaninę inkubuje się w temperaturze 37ºC przez 2 minuty i 1 mikrolitr odwrotnej transkryptazy i inkubuje przez 50 minut w temperaturze 37ºC. Wykonano qRT-PCR (ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym) genów przy użyciu genowego testu ekspresji TaqMan®. Poziomy ekspresji oblicza się stosując metodę 2-delta-delta-Ct.

Chemioterapia indukująca remisję obejmuje sterydową fazę wstępną 7 dni prednizonu 60 mgm2SCD. Właściwa faza indukcji remisji polega na podawaniu prednizonu w dawce 60 mgm2 dziennie od dnia 0 do dnia 28; winkrystyna 1,5 mgm2 w dniach 0, 7, 14 i 21; Doksorubicyna 25mgm2 w dniach 0, 7, 21; L-asparaginaza 10 000 Um2 w dniach 2, 4, 6, 8, 10 i 12. Etopozyd 300 mgm2 i cytarabina 300 mgm2 w dniach 22, 25 i 29. Chemioterapię dokanałową podaje się w dniach 0, 7, 14 i 21. Po schemacie indukcji remisji wykonuje się aspirację szpiku kostnego w celu oceny morfologii, jeśli stwierdza się mniej niż 5% blastów chłonnych, pacjenci kontynuują fazę konsolidacji z dużą dawką metotreksatu i 6 merkaptopuryny, a następnie fazę podtrzymującą do końca protokół.

Zmiennymi pośrednimi są liczba blastów obwodowych w dniu 0, badanie morfologii szpiku kostnego w dniu 14 oraz na koniec indukcji i na koniec indukcji MRD (minimalna choroba resztkowa).

Metformina będzie podawana grupie eksperymentalnej metodą randomizacji w dawce 1000mgm2 dziennie, z maksymalną dawką 850mg trzy razy dziennie, od dnia -7 do końca okresu indukcji remisji. Pobranie próbek krwi obwodowej w celu oznaczenia ekspresji genów ABCB1 i AMPK nastąpi w dniu -7 i pod koniec indukcji remisji. Zostanie przeprowadzona obserwacja pacjenta w celu obliczenia całkowitego i wolnego od zdarzeń przeżycia.