Effet de la metformine sur l'expression d'ABCB1 et d'AMPK chez les adolescents atteints de leucémie aiguë lymphoblastique nouvellement diagnostiquée

La leucémie aiguë lymphoblastique est le cancer le plus fréquent chez l'enfant et l'adolescent. À l'heure actuelle, la combinaison d'agents chimiothérapeutiques permet d'obtenir une rémission chez plus de 90 % des patients. Mais, les adolescents ont un pronostic défavorable par rapport aux enfants.

Les multiples gènes de résistance aux médicaments sont bien connus pour être la cause de la résistance dans différents cancers, les plus importants de ces gènes sont la famille de gènes ABCB, en particulier ABCB1. Cette résistance est également rapportée dans les leucémies aiguës lymphoblastiques. Des changements dans l'expression du gène AMPK (adénosine triphosphate) sont également liés aux effets antitumoraux dans la cellule.

La metformine, un biguanide, a démontré qu'elle diminue les niveaux d'ATP intracellulaire par l'activation de l'AMPK et le blocage de la glycoprotéine P, produit du gène ABCB1. De nombreux rapports avaient décrit l'effet de la metformine sur différents types de cancer. Chez l'adulte, l'utilisation de la metformine s'est révélée utile pour améliorer la survie globale et sans événement, liée à une faible expression d'ABCB1/MDR1 (multidrug resistance 1) et à une forte expression d'AMPK.

Les chercheurs proposent si la metformine a un effet sur ABCB1/MDR1 et AMPK pendant la phase d'induction de la rémission chez les adolescents atteints de leucémie aiguë lymphoblastique nouvellement diagnostiquée.

Hypothèse : Si la metformine est ajoutée à la chimiothérapie standard pendant l'induction de la rémission chez des adolescents mexicains atteints de leucémie aiguë lymphoblastique nouvellement diagnostiquée, les niveaux d'expression de l'ARNm (acide ribonucléidique messager) du gène ABCB1 diminueront et l'expression du gène AMPK augmentera à la fin de induction de la rémission.

Cette étude prétend évaluer l'effet de l'ajout de metformine à un schéma de chimiothérapie standard dans la modification de l'expression des gènes ABCB1 et AMPK lors de l'induction de la rémission d'adolescents nouvellement diagnostiqués atteints de leucémie aiguë lymphoblastique.

Également pour décrire les niveaux d'expression d'ABCB1 et d'AMPK d'adolescents en bonne santé et de ceux diagnostiqués avec une leucémie aiguë lymphoblastique. Comparer le niveau d'expression de ces gènes au moment du diagnostic et à la fin de l'induction de la rémission ; et de comparer la survie globale et sans événement en fonction de l'expression initiale de ces gènes et de l'utilisation de la metformine.

Les chercheurs ont proposé un essai clinique ouvert randomisé pour comparer la modification de l'expression des gènes ABCB1 et AMPK chez des adolescents atteints de leucémie aiguë lymphoblastique nouvellement diagnostiquée chez des patients recevant une chimiothérapie conventionnelle versus une chimiothérapie conventionnelle plus metformine 1000 mgm2SC par jour pendant la phase d'induction de la rémission du traitement.

Tous les patients atteints d'une nouvelle leucémie aiguë lymphoblastique âgés de 10 à 21 ans sont invités à participer, avec consentement éclairé autorisé. Les critères d'exclusion incluent les patients ayant déjà utilisé des stéroïdes ou une autre chimiothérapie, et les patients atteints du syndrome de Down.

Les enquêteurs prétendent recruter 10 patients pour chaque groupe. Après la confirmation du diagnostic morphologique et cytométrique de la leucémie aiguë lymphoblastique, les adolescents sont invités à participer avec un consentement éclairé signé par les patients et leur représentant légal.

Les échantillons sont obtenus à partir de cellules mononucléaires du sang périphérique, les ARN totaux (acide ribonucléique) sont obtenus par TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies). L'intégrité et la pureté de l'acide nucléique sont déterminées par spectrophotométrie. L'ARN est congelé à -80°C jusqu'à utilisation. La synthèse d'ADNc (acide désoxyribonucléique complémentaire) est faite à partir de 2 microgrammes d'ARN, des oligonucléotides, des dNTP, du tampon, du MgCl2, du KCl (chlorure de potassium) et du DTT (dithiothréitol) sont ajoutés pour obtenir un volume final de 20 microgrammes. Le mélange est incubé à 37°C pendant 2 minutes et 1 microlitre de transcriptase inverse, et incubé pendant 50 minutes à 37°C. La qRT-PCR (quantitative Real time-plymerase chain reaction) des gènes est réalisée à l'aide du test d'expression génique TaqMan®. Les niveaux d'expression sont calculés en utilisant la méthode 2-delta-delta-Ct.

La chimiothérapie d'induction de la rémission comprend une pré-phase stéroïdienne de 7 jours de prednisone 60 mgm2SCD. La phase d'induction de la rémission proprement dite consiste en prednisone 60 mgm2 par jour du jour 0 au jour 28 ; Vincristine 1,5 mgm2 aux jours 0, 7, 14 et 21 ; Doxorubicine 25mgm2 aux jours 0, 7, 21 ; L-asparaginase 10 000 Um2 aux jours 2, 4, 6, 8, 10 et 12. Etoposide 300mgm2 et cytarabine 300mgm2 aux jours 22, 25 et 29. La chimiothérapie intrathécale est administrée aux jours 0, 7, 14 et 21. Après le schéma d'induction de la rémission, une ponction de moelle osseuse est réalisée pour évaluer la morphologie, si moins de 5 % de blastes lymphoïdes sont rapportés, les patients continuent avec une phase de consolidation avec du méthotrexate à haute dose et de la 6 mercaptopurine, puis la phase d'entretien jusqu'à la fin de le protocole.

Les variables intermédiaires sont le nombre de blastes périphériques au jour 0, l'examen morphologique de la moelle osseuse au jour 14 et en fin d'induction et en fin d'induction MRD (maladie résiduelle minimale).

La metformine sera administrée au groupe expérimental par randomisation à une dose de 1000 mgm2 par jour, avec une dose maximale de 850 mg trois fois par jour, du jour -7 à la fin de la période d'induction de la rémission. Le prélèvement des échantillons de sang périphérique pour la détermination de l'expression des gènes ABCB1 et AMPK se fera au jour -7 et à la fin de l'induction de la rémission. Un suivi du patient sera effectué pour calculer la survie globale et sans événement.