Effekt av metformin på ABCB1 og AMPK uttrykk hos ungdom med nylig diagnostisert akutt lymfoblastisk leukemi

Akutt lymfatisk leukemi, er den hyppigste kreftformen hos barn og ungdom. Nå oppnår kombinasjonen av kjemoterapimidler remisjon hos mer enn 90 % av pasientene. Men ungdom har en ugunstig prognose sammenlignet med barn.

De flere medikamentresistente genene er velkjent årsaken til resistens i forskjellige kreftformer, de viktigste av disse genene er ABCB-genfamilien, spesielt ABCB1. Denne motstanden er også rapportert ved akutt lymfatisk leukemi. Også endringer i AMPK (adenosintrifosfat) genuttrykk er relatert til antitumoreffekter i cellen.

Metformin, et biguanid, har vist at det reduserer de intracellulære ATP-nivåene ved AMPK-aktivering, og blokkeringen av glykoprotein P, produktet av ABCB1-genet. Mange rapporter hadde beskrevet effekten av metformin på ulike krefttyper. Hos voksne har bruk av metformin vist seg å være nyttig for å forbedre den totale og hendelsesfrie overlevelsen, relatert til lav ABCB1/MDR1 (multidrugresistens 1) ekspresjon og høy AMPK-ekspresjon.

Undersøkerne foreslår om metforminet har noen effekt på ABCB1/MDR1 og AMPK under remisjonsinduksjonsfasen hos ungdom med nylig diagnostisert akutt lymfatisk leukemi.

Hypotese: Hvis metformin legges til standard kjemoterapi under remisjonsinduksjonen hos meksikanske ungdommer med nylig diagnostisert akutt lymfoblastisk leukemi, vil mRNA (messenger ribonucleid acid) ekspresjonsnivåer av ABCB1-genet reduseres og AMPK-genekspresjonen vil øke ved slutten av remisjonsinduksjon.

Denne studien later til å evaluere effekten av tilsetning av metformin til et standard kjemoterapiregime i modifikasjonen av uttrykket av ABCB1- og AMPK-genene under remisjonsinduksjonen av nydiagnostiserte ungdommer med akutt lymfoblastisk leukemi.

Også for å beskrive uttrykksnivåene av ABCB1 og AMPK hos friske ungdommer og de som er diagnostisert med akutt lymfatisk leukemi. Sammenlign ekspresjonsnivået til disse genene ved diagnose og ved slutten av remisjonsinduksjon; og å sammenligne den globale og hendelsesfrie overlevelsen basert på det første uttrykket av disse genene, og bruken av metformin.

Forskerne foreslo en randomisert åpen klinisk studie for å sammenligne modifikasjonen av uttrykket av ABCB1- og AMPK-genene hos ungdom med nylig diagnostisert akutt lymfatisk leukemi hos pasienter som får konvensjonell kjemoterapi versus konvensjonell kjemoterapi pluss metformin 1000 mgm2SC per dag i remisjonsinduksjonsfasen. behandling.

Alle pasienter med ny akutt lymfatisk leukemi mellom 10 og 21 år inviteres til å delta, med informert samtykke godkjent. Eksklusjonskriteriene inkluderer pasienter med tidligere bruk av steroider eller annen kjemoterapi, og pasienter med Downs syndrom.

Etterforskerne later til å registrere 10 pasienter for hver gruppe. Etter morfologisk og cytometrisk diagnosebekreftelse av akutt lymfoblastisk leukemi, inviteres ungdommene til å delta med informert samtykke signert av pasientene og juridisk autorisert representant.

Prøvene er hentet fra mononukleære celler fra perifert blod, det totale RNA (Ribonuceidsyre) er oppnådd av TRIzol® (Invitrogen(R) Life Technologies). Integriteten og renheten til nukleinsyren bestemmes ved spektrofotometri. RNA fryses ved -80ºC inntil nødvendig. DNAc-syntesen (komplementær desoksyribonukelsyre) er laget av 2 mikrogram RNA, oligonukleotider, dNTP-er, buffer, MgCl2, KCl (kaliumklorid) og DTT (ditiotreitol) tilsettes for å oppnå et endelig volum på 20 mikrogram. Blandingen inkuberes ved 37ºC i 2 minutter og 1 mikroliter invers transkriptase, og inkuberes i 50 minutter ved 37ºC. qRT-PCR (kvantitativ sanntids-plymerasekjedereaksjon) av genene lages ved å bruke den geniske ekspresjonsanalysen TaqMan®. Ekspresjonsnivåene beregnes ved å bruke 2-delta-delta-Ct-metoden.

Remisjonsinduksjonskjemoterapi inkluderer en steroidprefase på 7 dager med prednison 60 mgm2SCD. Den riktige remisjonsinduksjonsfasen består av prednison 60 mgm2 daglig fra dag 0 til 28; Vincristine 1,5 mgm2 på dag 0, 7, 14 og 21; Doxorubicin 25mgm2 på dag 0, 7, 21; L-asparaginase 10 000 Um2 på dag 2, 4, 6, 8, 10 og 12. Etoposid 300mgm2 og cytarabin 300mgm2 på dag 22, 25 og 29. Intratekal kjemoterapi gis på dag 0, 7, 14 og 21. Etter remisjonsinduksjonsskjemaet utføres benmargsaspirasjon for å evaluere morfologi, hvis mindre enn 5 % av lymfoid blast er rapportert, fortsetter pasientene med konsolideringsfase med høydose metotreksat og 6 merkaptopurin, og deretter vedlikeholdsfasen til slutten av protokollen.

Mellomvariablene er perifert blastantall på dag 0, morfologisk undersøkelse av benmarg på dag 14 og ved slutten av induksjon og slutten av induksjon MRD (minimal restsykdom).

Metformin vil bli administrert til forsøksgruppen ved randomisering i en dose på 1000mgm2 per dag, med maksimal dose på 850mg tre ganger daglig, fra dag -7 til slutten av remisjonsinduksjonsperioden. Innhentingen av de perifere blodprøvene for bestemmelse av uttrykket av genene ABCB1 og AMPK vil bli gjort på dag -7 og ved slutten av remisjonsinduksjonen. Oppfølging av pasienten vil bli gjort for å beregne den globale og hendelsesfrie overlevelsen.