Metformiinin vaikutus ABCB1- ja AMPK-ilmentymiseen nuorilla, joilla on äskettäin diagnosoitu akuutti lymfoblastinen leukemia

Akuutti lymfoblastinen leukemia on yleisin lasten ja nuorten syöpä. Tähän mennessä kemoterapia-aineiden yhdistelmällä saavutetaan remissio yli 90 prosentilla potilaista. Mutta nuorilla on haitallinen ennuste lapsiin verrattuna.

Useat lääkeresistentit geenit tunnetaan hyvin eri syöpien aiheuttajana, tärkeimmät näistä geeneistä ovat ABCB-geeniperhe, erityisesti ABCB1. Tätä vastustuskykyä on raportoitu myös akuutissa lymfoblastisessa leukemiassa. Myös AMPK (adenosiinitrifosfaatti) -geenin ilmentymisen muutokset liittyvät solun sisäisiin kasvainten vastaisiin vaikutuksiin.

Metformiini, biguanidi, on osoittanut, että se alentaa solunsisäisiä ATP-tasoja AMPK-aktivaatiolla ja estämällä glykoproteiini P:tä, joka on ABCB1-geenin tuote. Monissa raporteissa oli kuvattu metformiinin vaikutusta eri syöpätyyppeihin. Aikuisilla metformiinin käyttö on osoittautunut hyödylliseksi parantamaan yleistä ja tapahtumavapaata eloonjäämistä, mikä liittyy alhaiseen ABCB1/MDR1:n (monin lääkeresistenssi 1) ilmentymiseen ja korkeaan AMPK-ekspressioon.

Tutkijat ehdottavat, onko metformiinilla vaikutusta ABCB1/MDR1:een ja AMPK:hen remission induktiovaiheen aikana nuorilla, joilla on äskettäin diagnosoitu akuutti lymfoblastinen leukemia.

Hypoteesi: Jos metformiinia lisätään normaaliin kemoterapiaan remission induktion aikana meksikolaisilla nuorilla, joilla on äskettäin diagnosoitu akuutti lymfoblastinen leukemia, niin ABCB1-geenin mRNA:n (messenger ribonucleid acid) ilmentymistasot laskevat ja AMPK-geenin ilmentyminen lisääntyy hoidon lopussa. remission induktio.

Tämä tutkimus teeskentelee arvioivansa metformiinin lisäyksen vaikutusta tavanomaiseen kemoterapiahoitoon ABCB1- ja AMPK-geenien ilmentymisen modifioinnissa äskettäin diagnosoitujen nuorten, joilla on akuutti lymfoblastinen leukemia, remission induktion aikana.

Kuvaamaan myös ABCB1:n ja AMPK:n ilmentymistasoja terveillä nuorilla ja niillä, joilla on diagnosoitu akuutti lymfoblastinen leukemia. Vertaa näiden geenien ilmentymistasoa diagnoosin yhteydessä ja remissioinduktion lopussa; ja vertailla globaalia ja tapahtumavapaata eloonjäämistä näiden geenien alkuperäisen ilmentymisen ja metformiinin käytön perusteella.

Tutkijat ehdottivat satunnaistettua avointa kliinistä tutkimusta, jossa verrattaisiin ABCB1- ja AMPK-geenien ilmentymisen muutoksia nuorilla, joilla on äskettäin diagnosoitu akuutti lymfoblastinen leukemia potilailla, jotka saavat tavanomaista kemoterapiaa ja tavanomaista kemoterapiaa sekä metformiinia 1000 mgm2SC päivässä remission induktiovaiheen aikana. hoitoon.

Kaikki 10–21-vuotiaat potilaat, joilla on uusi akuutti lymfoblastinen leukemia, kutsutaan osallistumaan tietoisen suostumuksen saatuaan. Poissulkemiskriteerit sisältävät potilaat, jotka ovat aiemmin käyttäneet steroideja tai muuta kemoterapiaa, sekä potilaat, joilla on Downin oireyhtymä.

Tutkijat teeskentelevät rekisteröivänsä 10 potilasta kuhunkin ryhmään. Akuutin lymfoblastisen leukemian morfologisen ja sytometrisen diagnoosin vahvistamisen jälkeen nuoret kutsutaan osallistumaan potilaiden ja laillisesti valtuutetun edustajan allekirjoittamalla tietoisella suostumuksella.

Näytteet saadaan yksitumaisista soluista perifeerisestä verestä, kokonais-RNA (Ribonuceid acid) saadaan TRIzol®:lta (Invitrogen® Life Technologies). Nukleiinihapon eheys ja puhtaus määritetään spektrofotometrialla. RNA jäädytetään -80 ºC:ssa, kunnes sitä tarvitaan. DNAc (komplementaarinen desoksiribonukleiinihappo) -synteesi valmistetaan 2 mikrogrammasta RNA:ta, oligonukleotideja, dNTP:itä, puskuria, MgCl2:a, KCl:a (kaliumkloridi) ja DTT:tä (ditiotreitoli) lisätään 20 mikrogramman lopullisen tilavuuden saamiseksi. Seosta inkuboidaan 37 ºC:ssa 2 minuuttia ja 1 mikrolitrassa käänteistranskriptaasia, ja inkuboidaan 50 minuuttia 37 ºC:ssa. Geenien qRT-PCR (kvantitatiivinen reaaliaikainen plymeraasiketjureaktio) tehdään käyttämällä geeniekspressiomääritystä TaqMan®. Ilmentymistasot lasketaan käyttämällä 2-delta-delta-Ct-menetelmää.

Remission induktiokemoterapia sisältää 7 päivän steroidien esivaiheen 60 mgm2SCD:n prednisonia. Oikea remission induktiovaihe koostuu prednisonista 60 mgm2 päivittäin päivinä 0-28; vinkristiini 1,5 mgm2 päivinä 0, 7, 14 ja 21; doksorubisiini 25 mgm2 päivinä 0, 7, 21; L-asparaginaasi 10 000 Um2 päivinä 2, 4, 6, 8, 10 ja 12. Etoposidi 300 mgm2 ja sytarabiini 300 mgm2 päivinä 22, 25 ja 29. Intratekaalista kemoterapiaa annetaan päivinä 0, 7, 14 ja 21. Remissioinduktioohjelman jälkeen suoritetaan luuytimen aspiraatio morfologian arvioimiseksi, jos alle 5 % lymfaattisista blasteista raportoidaan, potilaat jatkavat konsolidaatiovaiheessa suuriannoksilla metotreksaattia ja 6 merkaptopuriinia ja sen jälkeen ylläpitovaihetta hoidon loppuun asti. protokollaa.

Välimuuttujat ovat perifeeristen blastien määrä päivänä 0, luuytimen morfologinen tutkimus päivinä 14 sekä induktion lopussa ja induktion lopussa MRD (minimaalinen jäännössairaus).

Metformiinia annetaan koeryhmälle satunnaistetusti annoksella 1000mgm2 päivässä, maksimiannoksella 850mg kolme kertaa päivässä, päivästä -7 remission induktiojakson loppuun. Perifeeristen verinäytteiden hankinta geenien ABCB1 ja AMPK ilmentymisen määrittämiseksi tehdään päivänä -7 ja remissioinduktion lopussa. Potilaan seuranta suoritetaan maailmanlaajuisen ja tapahtumattoman eloonjäämisen laskemiseksi.