Effekt av metformin på uttryck av ABCB1 och AMPK hos ungdomar med nyligen diagnostiserad akut lymfatisk leukemi

Akut lymfatisk leukemi är den vanligaste cancerformen hos barn och ungdomar. Vid det här laget uppnår kombinationen av kemoterapimedel remission hos mer än 90 % av patienterna. Men ungdomar har en ogynnsam prognos jämfört med barn.

De multipla läkemedelsresistenta generna är välkända orsaken till resistens i olika cancerformer, de viktigaste av dessa gener är ABCB-genfamiljen, speciellt ABCB1. Denna resistens rapporteras även vid akut lymfatisk leukemi. Även förändringar i AMPK (adenosintrifosfat) genuttryck är relaterat till antitumöreffekter i cellen.

Metformin, en biguanid, har visat att den minskar de intracellulära ATP-nivåerna genom AMPK-aktivering och blockaden av glykoproteinet P, produkten av ABCB1-genen. Många rapporter hade beskrivit effekten av metformin på olika cancertyper. Hos vuxna har användningen av metformin visat sig vara användbar för att förbättra den totala och händelsefria överlevnaden, relaterad till lågt uttryck av ABCB1/MDR1 (multidrogresistens 1) och högt AMPK-uttryck.

Utredarna föreslår om metforminet har någon effekt på ABCB1/MDR1 och AMPK under remissionsinduktionsfasen hos ungdomar med nydiagnostiserad akut lymfatisk leukemi.

Hypotes: Om metformin läggs till standardkemoterapi under remissionsinduktionen hos mexikanska ungdomar med nydiagnostiserad akut lymfoblastisk leukemi, kommer uttrycksnivåerna för mRNA (budbärarribonukleidsyra) för ABCB1-genen att minska och AMPK-genuttrycket kommer att öka i slutet av remissionsinduktion.

Denna studie låtsas utvärdera effekten av tillägg av metformin till en standard kemoterapiregim vid modifiering av uttrycket av ABCB1- och AMPK-gener under remissionsinduktion av nydiagnostiserade ungdomar med akut lymfoblastisk leukemi.

Även för att beskriva uttrycksnivåerna av ABCB1 och AMPK hos friska ungdomar och de som diagnostiserats med akut lymfatisk leukemi. Jämför uttrycksnivån för dessa gener vid diagnos och i slutet av remissionsinduktion; och att jämföra den globala och händelsefria överlevnaden baserat på det initiala uttrycket av dessa gener och användningen av metformin.

Utredarna föreslog en randomiserad öppen klinisk prövning för att jämföra modifieringen av uttrycket av ABCB1- och AMPK-generna hos ungdomar med nydiagnostiserad akut lymfoblastisk leukemi hos patienter som får konventionell kemoterapi jämfört med konventionell kemoterapi plus metformin 1000 mgm2SC per dag under remissionsinduktionsfasen behandling.

Alla patienter med ny akut lymfatisk leukemi mellan 10 och 21 år inbjuds att delta, med informerat samtycke. Uteslutningskriterierna inkluderar patienter med tidigare användning av steroider eller annan kemoterapi, och patienter med Downs syndrom.

Utredarna låtsas registrera 10 patienter för varje grupp. Efter den morfologiska och cytometriska diagnosbekräftelsen av akut lymfoblastisk leukemi, inbjuds ungdomarna att delta med informerat samtycke undertecknat av patienterna och juridiskt auktoriserad representant.

Proverna erhålls från mononukleära celler från perifert blod, det totala RNA (Ribonuceidsyra) erhålls av TRIzol® (Invitrogen(R) Life Technologies). Nukleinsyrans integritet och renhet bestäms med spektrofotometri. RNA:t fryses vid -80ºC tills det behövs. DNAc-syntesen (komplementär desoxiribonukelsyra) görs från 2 mikrogram RNA, oligonukleotider, dNTPs, buffert, MgCl2, KCl (kaliumklorid) och DTT (ditiotreitol) tillsätts för att erhålla en slutlig volym på 20 mikrogram. Blandningen inkuberas vid 37ºC i 2 minuter och 1 mikroliter omvänt transkriptas och inkuberas i 50 minuter vid 37ºC. qRT-PCR (kvantitativ realtid-plymeras-kedjereaktion) av generna görs med hjälp av den geniska expressionsanalysen TaqMan®. Expressionsnivåerna beräknas med 2-delta-delta-Ct-metoden.

Remissionsinduktionskemoterapin inkluderar en steroidprefas på 7 dagar med prednison 60 mgm2SCD. Den korrekta remissionsinduktionsfasen består av prednison 60 mgm2 dagligen från dag 0 till 28; Vinkristin 1,5 mgm2 dag 0, 7, 14 och 21; Doxorubicin 25 mgm2 dag 0, 7, 21; L-asparaginas 10 000 Um2 dag 2, 4, 6, 8, 10 och 12. Etoposid 300mgm2 och cytarabin 300mgm2 dag 22, 25 och 29. Intratekal kemoterapi ges dag 0, 7, 14 och 21. Efter remissionsinduktionsschemat utförs benmärgsaspiration för att utvärdera morfologi, om mindre än 5 % av lymfoidblasten rapporteras fortsätter patienterna med konsolideringsfasen med högdos metotrexat och 6 merkaptopurin, och efter det underhållsfasen till slutet av protokollet.

De mellanliggande variablerna är antalet perifera blast på dag 0, morfologisk undersökning av benmärg på dag 14 och i slutet av induktion och slutet av induktion MRD (minimal restsjukdom).

Metformin kommer att administreras till försöksgruppen genom randomisering i en dos på 1000 mgm2 per dag, med en maximal dos på 850 mg tre gånger om dagen, från dag -7 till slutet av induktionsperioden för remission. Insamlingen av de perifera blodproverna för bestämning av uttrycket av generna ABCB1 och AMPK kommer att göras på dag -7 och i slutet av remissionsinduktionen. Uppföljning av patienten kommer att göras för att beräkna den globala och händelsefria överlevnaden.