Virkning af metformin på ABCB1- og AMPK-ekspression hos unge med nyligt diagnosticeret akut lymfatisk leukæmi

Akut lymfatisk leukæmi, er den hyppigste kræftsygdom hos børn og unge. På nuværende tidspunkt opnår kombinationen af ​​kemoterapimidler remission hos mere end 90 % af patienterne. Men unge har en ugunstig prognose sammenlignet med børn.

De multiple lægemiddelresistente gener er velkendte årsagen til resistens i forskellige kræftformer, de vigtigste af disse gener er ABCB-genfamilien, specielt ABCB1. Denne resistens er også rapporteret ved akut lymfatisk leukæmi. Også ændringer i AMPK (adenosintriphosphat) genekspression er relateret til antitumoreffekter i cellen.

Metformin, et biguanid, har vist, at det reducerer de intracellulære ATP-niveauer ved AMPK-aktivering og blokeringen af ​​glycoprotein P, produktet af ABCB1-genet. Mange rapporter havde beskrevet virkningen af ​​metformin på forskellige kræfttyper. Hos voksne har brugen af ​​metformin vist sig at være nyttig til at forbedre den samlede og hændelsesfrie overlevelse, relateret til lav ABCB1/MDR1 (multidrug resistens 1) ekspression og høj AMPK ekspression.

Undersøgerne foreslår, om metforminet har nogen effekt på ABCB1/MDR1 og AMPK under remissionsinduktionsfasen hos unge med nyligt diagnosticeret akut lymfatisk leukæmi.

Hypotese: Hvis metformin tilsættes standard kemoterapi under remissionsinduktionen hos mexicanske unge med nyligt diagnosticeret akut lymfoblastisk leukæmi, så vil mRNA (messenger ribonucleid acid) ekspressionsniveauerne af ABCB1-genet falde, og AMPK-genekspressionen vil stige i slutningen af remission induktion.

Denne undersøgelse foregiver at evaluere effekten af ​​tilsætning af metformin til et standard kemoterapiregime i modifikationen af ​​ekspressionen af ​​ABCB1- og AMPK-generne under remissionsinduktionen af ​​nydiagnosticerede unge med akut lymfatisk leukæmi.

Også for at beskrive ekspressionsniveauerne af ABCB1 og AMPK hos raske unge og dem, der er diagnosticeret med akut lymfatisk leukæmi. Sammenlign ekspressionsniveauet af disse gener ved diagnose og ved slutningen af ​​remissionsinduktion; og at sammenligne den globale og begivenhedsfrie overlevelse baseret på den indledende ekspression af disse gener og brugen af ​​metformin.

Forskerne foreslog et randomiseret åbent klinisk forsøg for at sammenligne modifikationen af ​​ekspressionen af ​​ABCB1- og AMPK-generne hos unge med nyligt diagnosticeret akut lymfoblastisk leukæmi hos patienter, der fik konventionel kemoterapi versus konventionel kemoterapi plus metformin 1000 mgm2SC pr. dag under remissionsinduktionsfasen. behandling.

Alle patienter med ny akut lymfatisk leukæmi mellem 10 og 21 år inviteres til at deltage med informeret samtykke. Eksklusionskriterierne omfatter patienter med tidligere brug af steroider eller anden kemoterapi og patienter med Downs syndrom.

Efterforskerne foregiver at tilmelde 10 patienter for hver gruppe. Efter den morfologiske og cytometriske diagnosebekræftelse af akut lymfatisk leukæmi, inviteres de unge til at deltage med informeret samtykke underskrevet af patienterne og juridisk autoriseret repræsentant.

Prøverne er opnået fra mononukleære celler fra perifert blod, det totale RNA (Ribonuceidsyre) er opnået af TRIzol® (Invitrogen(R) Life Technologies). Integriteten og renheden af ​​nukleinsyren bestemmes ved spektrofotometri. RNA'et fryses ved -80ºC indtil det skal bruges. DNAc-syntesen (komplementær desoxyribonukelsyre) er lavet ud fra 2 mikrogram RNA, oligonukleotider, dNTP'er, buffer, MgCl2, KCl (kaliumchlorid) og DTT (dithiothreitol) tilsættes for at opnå et slutvolumen på 20 mikrogram. Blandingen inkuberes ved 37ºC i 2 minutter og 1 mikroliter invers transkriptase og inkuberes i 50 minutter ved 37ºC. qRT-PCR (kvantitativ Real-time-plymerase-kædereaktion) af generne er lavet ved hjælp af det genetiske ekspressionsassay TaqMan®. Ekspressionsniveauerne beregnes ved hjælp af 2-delta-delta-Ct-metoden.

Remissionsinduktionskemoterapien inkluderer en steroid præfase på 7 dage med prednison 60 mgm2SCD. Den korrekte remissionsinduktionsfase består af prednison 60 mgm2 dagligt fra dag 0 til 28; Vincristin 1,5 mgm2 på dag 0, 7, 14 og 21; Doxorubicin 25mgm2 på dag 0, 7, 21; L-asparaginase 10.000 Um2 på dag 2, 4, 6, 8, 10 og 12. Etoposid 300mgm2 og cytarabin 300mgm2 på dag 22, 25 og 29. Intratekal kemoterapi administreres på dag 0, 7, 14 og 21. Efter remissionsinduktionsskemaet udføres knoglemarvsaspiration for at evaluere morfologi, hvis mindre end 5 % af lymfoid blast er rapporteret, fortsætter patienterne med konsolideringsfase med høj dosis methotrexat og 6 mercaptopurin, og derefter vedligeholdelsesfasen indtil slutningen af protokollen.

De mellemliggende variabler er det perifere blasttal på dag 0, morfologisk undersøgelse af knoglemarv på dag 14 og ved slutningen af ​​induktion og slutningen af ​​induktion MRD (minimal restsygdom).

Metformin vil blive administreret til forsøgsgruppen ved randomisering i en dosis på 1000mgm2 pr. dag, med en maksimal dosis på 850mg tre gange dagligt, fra dag -7 til slutningen af ​​remissionsinduktionsperioden. Indsamlingen af ​​de perifere blodprøver til bestemmelse af ekspressionen af ​​generne ABCB1 og AMPK vil blive foretaget på dag -7 og ved slutningen af ​​remissionsinduktionen. Opfølgning af patienten vil blive udført for at beregne den globale og hændelsesfrie overlevelse.