Effetto della metformina sull'espressione di ABCB1 e AMPK negli adolescenti con leucemia linfoblastica acuta di nuova diagnosi

La leucemia linfoblastica acuta, è il tumore più frequente nei bambini e negli adolescenti. Ormai, la combinazione di agenti chemioterapici raggiunge la remissione in oltre il 90% dei pazienti. Ma gli adolescenti hanno una prognosi sfavorevole rispetto ai bambini.

I geni multipli resistenti ai farmaci sono ben noti come causa di resistenza in diversi tipi di cancro, i più importanti di questi geni sono la famiglia di geni ABCB, in particolare ABCB1. Questa resistenza è riportata anche nella leucemia linfoblastica acuta. Anche i cambiamenti nell'espressione del gene AMPK (adenosina trifosfato) sono correlati agli effetti antitumorali all'interno della cellula.

La metformina, una biguanide, ha dimostrato di diminuire i livelli di ATP intracellulare mediante l'attivazione di AMPK e il blocco della glicoproteina P, prodotto del gene ABCB1. Molti rapporti avevano descritto l'effetto della metformina su diversi tipi di cancro. Negli adulti, l'uso di metformina si è dimostrato utile per migliorare la sopravvivenza globale e libera da eventi, correlata alla bassa espressione di ABCB1/MDR1 (resistenza multifarmaco 1) e all'elevata espressione di AMPK.

I ricercatori propongono se la metformina abbia qualche effetto su ABCB1/MDR1 e AMPK durante la fase di induzione della remissione negli adolescenti con leucemia linfoblastica acuta di nuova diagnosi.

Ipotesi: se la metformina viene aggiunta alla chemioterapia standard durante l'induzione della remissione negli adolescenti messicani con leucemia linfoblastica acuta di nuova diagnosi, i livelli di espressione dell'mRNA (acido ribonucleide messaggero) del gene ABCB1 diminuiranno e l'espressione del gene AMPK aumenterà alla fine del induzione della remissione.

Questo studio pretende di valutare l'effetto dell'aggiunta di metformina a un regime chemioterapico standard nella modifica dell'espressione dei geni ABCB1 e AMPK durante l'induzione della remissione di adolescenti con leucemia linfoblastica acuta di nuova diagnosi.

Anche per descrivere i livelli di espressione di ABCB1 e AMPK di adolescenti sani e di quelli con diagnosi di leucemia linfoblastica acuta. Confrontare il livello di espressione di quei geni alla diagnosi e alla fine dell'induzione della remissione; e per confrontare la sopravvivenza globale e libera da eventi basata sull'espressione iniziale di quei geni e l'uso di metformina.

I ricercatori hanno proposto uno studio clinico aperto randomizzato per confrontare la modifica dell'espressione dei geni ABCB1 e AMPK negli adolescenti con leucemia linfoblastica acuta di nuova diagnosi in pazienti sottoposti a chemioterapia convenzionale rispetto a chemioterapia convenzionale più metformina 1000 mgm2SC al giorno durante la fase di induzione della remissione del trattamento.

Tutti i pazienti con leucemia linfoblastica acuta di nuova età tra i 10 e i 21 anni sono invitati a partecipare, con consenso informato autorizzato. I criteri di esclusione includono pazienti con precedente uso di steroidi o altra chemioterapia e pazienti con sindrome di Down.

Gli investigatori pretendono di arruolare 10 pazienti per ogni gruppo. Dopo la conferma della diagnosi morfologica e citometrica di leucemia linfoblastica acuta, gli adolescenti sono invitati a partecipare con il consenso informato firmato dai pazienti e dal legale rappresentante.

I campioni sono ottenuti da cellule mononucleate da sangue periferico, l'RNA totale (acido ribonuceide) è ottenuto da TRIzol ® (Invitrogen® Life Technologies). L'integrità e la purezza dell'acido nucleico sono determinate mediante spettrofotometria. L'RNA viene congelato a -80ºC fino al momento dell'uso. La sintesi del DNAc (acido desossiribonucelico complementare) è composta da 2 microgrammi di RNA, oligonucleotidi, dNTP, tampone, MgCl2, KCl (cloruro di potassio) e DTT (ditiotreitolo) vengono aggiunti per ottenere un volume finale di 20 microgrammi. La miscela viene incubata a 37ºC per 2 minuti e 1 microlitro di trascrittasi inversa e incubata per 50 minuti a 37ºC. La qRT-PCR (reazione quantitativa a catena della plymerase in tempo reale) dei geni viene effettuata utilizzando il test di espressione genica TaqMan®. I livelli di espressione sono calcolati utilizzando il metodo 2-delta-delta-Ct.

La chemioterapia di induzione della remissione include una pre-fase steroidea di 7 giorni di prednisone 60 mgm2SCD. La corretta fase di induzione della remissione consiste nel prednisone 60 mgm2 al giorno dal giorno 0 al giorno 28; Vincristina 1,5 mgm2 nei giorni 0, 7, 14 e 21; Doxorubicina 25mgm2 nei giorni 0, 7, 21; L-asparaginasi 10.000 Um2 nei giorni 2, 4, 6, 8, 10 e 12. Etoposide 300 mgm2 e citarabina 300 mgm2 nei giorni 22, 25 e 29. La chemioterapia intratecale viene somministrata nei giorni 0, 7, 14 e 21. Dopo lo schema di induzione della remissione, viene eseguita l'aspirazione del midollo osseo per valutare la morfologia, se viene riportato meno del 5% di blasti linfoidi, i pazienti continuano con la fase di consolidamento con alte dosi di metotrexato e 6 mercaptopurina, e successivamente la fase di mantenimento fino alla fine del il protocollo.

Le variabili intermedie sono la conta dei blasti periferici al giorno 0, l'esame morfologico del midollo osseo al giorno 14 e alla fine dell'induzione e alla fine dell'induzione MRD (malattia residua minima).

La metformina verrà somministrata al gruppo sperimentale mediante randomizzazione alla dose di 1000 mgm2 al giorno, con una dose massima di 850 mg tre volte al giorno, dal giorno -7 alla fine del periodo di induzione della remissione. Il prelievo dei campioni di sangue periferico per la determinazione dell'espressione dei geni ABCB1 e AMPK sarà effettuato il giorno -7 e al termine dell'induzione della remissione. Il follow-up del paziente sarà effettuato per calcolare la sopravvivenza globale e libera da eventi.