Efecto de la metformina sobre la expresión de ABCB1 y AMPK en adolescentes con leucemia linfoblástica aguda recién diagnosticada

La leucemia linfoblástica aguda, es el cáncer más frecuente en niños y adolescentes. Por ahora, la combinación de agentes de quimioterapia logra la remisión en más del 90% de los pacientes. Pero, los adolescentes tienen un pronóstico adverso en comparación con los niños.

Los genes de resistencia a múltiples fármacos son bien conocidos por causar resistencia en diferentes tipos de cáncer, los más importantes de estos genes son la familia de genes ABCB, especialmente ABCB1. Esta resistencia también se informa en la leucemia linfoblástica aguda. También los cambios en la expresión del gen AMPK (trifosfato de adenosina) están relacionados con los efectos antitumorales dentro de la célula.

La metformina, una biguanida, ha demostrado que disminuye los niveles de ATP intracelular por la activación de AMPK y el bloqueo de la glicoproteína P, producto del gen ABCB1. Muchos informes habían descrito el efecto de la metformina en diferentes tipos de cáncer. En adultos, el uso de metformina ha demostrado ser útil para mejorar la supervivencia global y libre de eventos, relacionada con la baja expresión de ABCB1/MDR1 (resistencia a múltiples fármacos 1) y la alta expresión de AMPK.

Los investigadores proponen si la metformina tiene algún efecto sobre ABCB1/MDR1 y AMPK durante la fase de inducción de la remisión en adolescentes con leucemia linfoblástica aguda recién diagnosticada.

Hipótesis: Si se agrega metformina a la quimioterapia estándar durante la inducción a la remisión en adolescentes mexicanos con leucemia linfoblástica aguda recién diagnosticada, los niveles de expresión del ARNm (ácido ribonucleido mensajero) del gen ABCB1 disminuirán y la expresión del gen AMPK aumentará al final del inducción a la remisión.

Este estudio pretende evaluar el efecto de la adición de metformina a un régimen de quimioterapia estándar en la modificación de la expresión de los genes ABCB1 y AMPK durante la inducción a la remisión de adolescentes recién diagnosticados con leucemia linfoblástica aguda.

También describir los niveles de expresión de ABCB1 y AMPK de adolescentes sanos y diagnosticados de leucemia linfoblástica aguda. Compare el nivel de expresión de esos genes en el momento del diagnóstico y al final de la inducción de la remisión; y comparar la supervivencia global y libre de eventos en función de la expresión inicial de esos genes y el uso de metformina.

Los investigadores propusieron un ensayo clínico abierto aleatorizado para comparar la modificación de la expresión de los genes ABCB1 y AMPK en adolescentes con leucemia linfoblástica aguda recién diagnosticada en pacientes que reciben quimioterapia convencional versus quimioterapia convencional más metformina 1000 mgm2SC por día durante la fase de inducción a la remisión de la tratamiento.

Se invita a participar a todos los pacientes con leucemia linfoblástica aguda nueva entre 10 y 21 años, previo consentimiento informado autorizado. Los criterios de exclusión incluyen pacientes con uso previo de esteroides u otra quimioterapia y pacientes con síndrome de Down.

Los investigadores pretenden enrolar 10 pacientes para cada grupo. Luego de la confirmación del diagnóstico morfológico y citométrico de leucemia linfoblástica aguda, los adolescentes son invitados a participar con consentimiento informado firmado por los pacientes y representante legalmente autorizado.

Las muestras se obtienen a partir de células mononucleares de sangre periférica, el ARN total (ácido ribonuceido) se obtiene mediante TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies). La integridad y pureza del ácido nucleico se determinan por espectrofotometría. El ARN se congela a -80ºC hasta que se necesite. La síntesis de DNAc (ácido desoxirribonucélico complementario) se realiza a partir de 2 microgramos de ARN, se añaden oligonucleótidos, dNTPs, tampón, MgCl2, KCl (cloruro de potasio) y DTT (ditiotreitol) para obtener un volumen final de 20 microgramos. La mezcla se incuba a 37ºC durante 2 minutos y 1 microlitro de transcriptasa inversa, y se incuba durante 50 minutos a 37ºC. La qRT-PCR (reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa en tiempo real) de los genes se realiza mediante el ensayo de expresión génica TaqMan®. Los niveles de expresión se calculan utilizando el método 2-delta-delta-Ct.

La quimioterapia de inducción a la remisión incluye una prefase de esteroides de 7 días de prednisona 60 mgm2SCD. La fase adecuada de inducción a la remisión consiste en prednisona 60 mgm2 diarios desde el día 0 al 28; Vincristina 1,5 mgm2 los días 0, 7, 14 y 21; Doxorrubicina 25mgm2 los días 0, 7, 21; L-asparaginasa 10.000 Um2 los días 2, 4, 6, 8, 10 y 12. Etopósido 300mgm2 y citarabina 300mgm2 los días 22, 25 y 29. La quimioterapia intratecal se administra los días 0, 7, 14 y 21. Luego del esquema de inducción a la remisión, se realiza aspirado de médula ósea para evaluar morfología, si se reporta menos del 5% de blastos linfoides, los pacientes continúan con fase de consolidación con dosis altas de metotrexato y 6 mercaptopurinas, y luego fase de mantenimiento hasta el final de la misma. el protocolo.

Las variables intermedias son el recuento de blastos periféricos en el día 0, el examen de morfología de la médula ósea en los días 14 y al final de la inducción y la EMR (enfermedad residual mínima) al final de la inducción.

Al grupo experimental se le administrará metformina por aleatorización a una dosis de 1000 mgm2 por día, con dosis máxima de 850 mg tres veces al día, desde el día -7 hasta el final del período de inducción a la remisión. La obtención de las muestras de sangre periférica para la determinación de la expresión de los genes ABCB1 y AMPK se realizará el día -7 y al final de la inducción a la remisión. Se realizará un seguimiento del paciente para calcular la supervivencia global y libre de eventos.