Влияние метформина на экспрессию ABCB1 и AMPK у подростков с недавно диагностированным острым лимфобластным лейкозом

Острый лимфобластный лейкоз является наиболее частым онкологическим заболеванием у детей и подростков. К настоящему времени комбинированная химиотерапия позволяет добиться ремиссии более чем у 90% больных. Но у подростков прогноз неблагоприятный по сравнению с детьми.

Хорошо известно, что множественные гены лекарственной устойчивости вызывают резистентность при различных видах рака, наиболее важными из этих генов являются гены семейства ABCB, особенно ABCB1. Об этой резистентности также сообщают при остром лимфобластном лейкозе. Также изменения в экспрессии гена AMPK (аденозинтрифосфат) связаны с противоопухолевым действием внутри клетки.

Метформин, бигуанид, продемонстрировал, что снижает внутриклеточные уровни АТФ за счет активации AMPK и блокады гликопротеина P, продукта гена ABCB1. Во многих отчетах описывалось влияние метформина на различные типы рака. У взрослых использование метформина продемонстрировало полезное улучшение общей и бессобытийной выживаемости, что связано с низкой экспрессией ABCB1/MDR1 (множественная лекарственная устойчивость 1) и высокой экспрессией AMPK.

Исследователи предполагают, оказывает ли метформин какое-либо влияние на ABCB1/MDR1 и AMPK во время фазы индукции ремиссии у подростков с недавно диагностированным острым лимфобластным лейкозом.

Гипотеза: если метформин добавить к стандартной химиотерапии во время индукции ремиссии у мексиканских подростков с недавно диагностированным острым лимфобластным лейкозом, уровень экспрессии мРНК (мессенджер рибонуклеидной кислоты) гена ABCB1 снизится, а экспрессия гена AMPK увеличится в конце индукция ремиссии.

Это исследование претендует на оценку влияния добавления метформина к стандартной схеме химиотерапии на модификацию экспрессии генов ABCB1 и AMPK во время индукции ремиссии у подростков с впервые диагностированным острым лимфобластным лейкозом.

Также описать уровни экспрессии ABCB1 и AMPK у здоровых подростков и лиц с диагнозом острый лимфобластный лейкоз. Сравните уровень экспрессии этих генов при постановке диагноза и в конце индукции ремиссии; и сравнить глобальную и бессобытийную выживаемость на основе начальной экспрессии этих генов и использования метформина.

Исследователи предложили провести рандомизированное открытое клиническое исследование для сравнения модификации экспрессии генов ABCB1 и AMPK у подростков с недавно диагностированным острым лимфобластным лейкозом у пациентов, получающих обычную химиотерапию, по сравнению с обычной химиотерапией плюс метформин 1000 мг/м2 СК в день в фазе индукции ремиссии. уход.

К участию приглашаются все пациенты с впервые выявленным острым лимфобластным лейкозом в возрасте от 10 до 21 года, получившие информированное согласие. Критерии исключения включают пациентов, ранее принимавших стероиды или другую химиотерапию, а также пациентов с синдромом Дауна.

Исследователи делают вид, что набирают по 10 пациентов в каждую группу. После морфологического и цитометрического подтверждения диагноза острого лимфобластного лейкоза к участию приглашаются подростки с информированного согласия, подписанного больными и их законными представителями.

Образцы получают из мононуклеарных клеток периферической крови, общую РНК (рибонуклеидную кислоту) получают с помощью TRIzol® (Invitrogen(R) Life Technologies). Целостность и чистоту нуклеиновой кислоты определяют спектрофотометрически. РНК замораживают при -80ºC до тех пор, пока она не понадобится. Синтез DNAc (комплементарной дезоксирибонуклеиновой кислоты) производится из 2 мкг РНК, олигонуклеотидов, dNTP, буфера, MgCl2, KCl (хлорид калия) и DTT (дитиотреитол) добавляются для получения конечного объема 20 мкг. Смесь инкубируют при 37ºC в течение 2 минут и 1 мкл обратной транскриптазы и инкубируют в течение 50 минут при 37ºC. qRT-PCR (количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени) генов проводится с использованием анализа генной экспрессии TaqMan®. Уровни экспрессии рассчитывают с использованием метода 2-дельта-дельта-Ct.

Химиотерапия для индукции ремиссии включает префазу стероидов в течение 7 дней с преднизоном 60 мг/м2SCD. Надлежащая фаза индукции ремиссии заключается в приеме преднизолона в дозе 60 мг/м2 ежедневно с 0 по 28 день; Винкристин 1,5 мг/м2 в дни 0, 7, 14 и 21; доксорубицин 25 мг/м2 в дни 0, 7, 21; L-аспарагиназа 10 000 м 2 на 2, 4, 6, 8, 10 и 12 дни. Этопозид 300 мг м 2 и цитарабин 300 мг м 2 на 22, 25 и 29 дни. Интратекальную химиотерапию проводят на 0, 7, 14 и 21 дни. После схемы индукции ремиссии выполняется аспирация костного мозга для оценки морфологии, если сообщается менее 5% лимфоидных бластов, пациенты продолжают фазу консолидации с высокими дозами метотрексата и 6-меркаптопурина, а затем поддерживающую фазу до конца лечения. протокол.

Промежуточными переменными являются количество периферических бластов на 0-й день, морфологическое исследование костного мозга на 14-й день и в конце индукции и в конце индукции MRD (минимальная остаточная болезнь).

Метформин будет вводиться экспериментальной группе методом рандомизации в дозе 1000 мг/м2 в сутки, с максимальной дозой 850 мг три раза в сутки, с -7 дня до окончания периода индукции ремиссии. Забор образцов периферической крови для определения экспрессии генов ABCB1 и AMPK будет производиться на -7 день и в конце индукции ремиссии. Будет проведено последующее наблюдение за пациентом для расчета глобальной и бессобытийной выживаемости.