Effect van metformine op ABCB1- en AMPK-expressie bij adolescenten met nieuw gediagnosticeerde acute lymfoblastische leukemie

Acute lymfatische leukemie is de meest voorkomende vorm van kanker bij kinderen en adolescenten. Inmiddels bereikt de combinatie van chemotherapie bij meer dan 90% van de patiënten remissie. Maar adolescenten hebben een ongunstige prognose in vergelijking met kinderen.

De meervoudige geneesmiddelresistente genen zijn algemeen bekend als de oorzaak van resistentie bij verschillende kankers. De belangrijkste van deze genen zijn de ABCB-genenfamilie, in het bijzonder ABCB1. Deze resistentie wordt ook gemeld bij acute lymfatische leukemie. Ook veranderingen in de genexpressie van AMPK (adenosinetrifosfaat) zijn gerelateerd aan antitumoreffecten in de cel.

Metformine, een biguanide, heeft aangetoond dat het de intracellulaire ATP-niveaus verlaagt door AMPK-activering en de blokkade van het glycoproteïne P, product van het ABCB1-gen. Veel rapporten hadden het effect van metformine op verschillende soorten kanker beschreven. Bij volwassenen is aangetoond dat het gebruik van metformine nuttig is bij het verbeteren van de algehele en gebeurtenisvrije overleving, gerelateerd aan lage ABCB1/MDR1-expressie (multidrugresistentie 1) en hoge AMPK-expressie.

De onderzoekers stellen voor of metformine enig effect heeft op ABCB1/MDR1 en AMPK tijdens de remissie-inductiefase bij adolescenten met nieuw gediagnosticeerde acute lymfoblastische leukemie.

Hypothese: Als metformine wordt toegevoegd aan standaardchemotherapie tijdens de remissie-inductie bij Mexicaanse adolescenten met nieuw gediagnosticeerde acute lymfoblastische leukemie, zullen de mRNA-expressieniveaus (messenger ribonucleid acid) van het ABCB1-gen afnemen en zal de AMPK-genexpressie toenemen aan het einde van de behandeling. remissie inductie.

Deze studie pretendeert het effect te evalueren van de toevoeging van metformine aan een standaard chemotherapieregime bij de wijziging van de expressie van de ABCB1- en AMPK-genen tijdens de remissie-inductie van nieuw gediagnosticeerde adolescenten met acute lymfoblastische leukemie.

Ook om de expressieniveaus van ABCB1 en AMPK van gezonde adolescenten en degenen met de diagnose acute lymfoblastische leukemie te beschrijven. Vergelijk het expressieniveau van die genen bij diagnose en aan het einde van remissie-inductie; en om de globale en gebeurtenisvrije overleving te vergelijken op basis van de initiële expressie van die genen en het gebruik van metformine.

De onderzoekers stelden een gerandomiseerde open klinische studie voor om de wijziging van de expressie van de ABCB1- en AMPK-genen te vergelijken bij adolescenten met nieuw gediagnosticeerde acute lymfatische leukemie bij patiënten die conventionele chemotherapie kregen versus conventionele chemotherapie plus metformine 1000 mgm2SC per dag tijdens de remissie-inductiefase van de behandeling.

Alle patiënten met nieuwe acute lymfatische leukemie tussen 10 en 21 jaar oud worden uitgenodigd om deel te nemen, met toestemming voor geïnformeerde toestemming. De uitsluitingscriteria omvatten patiënten met eerder gebruik van steroïden of andere chemotherapie en patiënten met het syndroom van Down.

De onderzoekers doen alsof ze voor elke groep 10 patiënten inschrijven. Na de bevestiging van de morfologische en cytometrische diagnose van acute lymfoblastische leukemie, worden de adolescenten uitgenodigd om deel te nemen met geïnformeerde toestemming ondertekend door de patiënten en wettelijk gemachtigde vertegenwoordiger.

De monsters worden verkregen uit mononucleaire cellen uit perifeer bloed, het totale RNA (Ribonuceid acid) wordt verkregen door TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies). De integriteit en zuiverheid van het nucleïnezuur worden bepaald door spectrofotometrie. Het RNA wordt tot gebruik ingevroren bij -80°C. De DNAc-synthese (complementair desoxyribonucelzuur) wordt gemaakt van 2 microgram RNA, oligonucleotiden, dNTP's, buffer, MgCl2, KCl (kaliumchloride) en DTT (dithiothreitol) worden toegevoegd om een ​​uiteindelijk volume van 20 microgram te verkrijgen. Het mengsel wordt gedurende 2 minuten bij 37°C en 1 microliter inverse transcriptase geïncubeerd en gedurende 50 minuten bij 37°C geïncubeerd. De qRT-PCR (kwantitatieve realtime-plymerasekettingreactie) van de genen wordt gemaakt met behulp van de genexpressietest TaqMan®. De expressieniveaus worden berekend met behulp van de 2-delta-delta-Ct-methode.

De remissie-inductiechemotherapie omvat een steroïde prefase van 7 dagen prednison 60 mgm2SCD. De juiste remissie-inductiefase bestaat uit prednison 60 mgm2 dagelijks van dag 0 tot 28; Vincristine 1,5 mgm2 op dag 0, 7, 14 en 21; Doxorubicine 25mgm2 op dag 0, 7, 21; L-asparaginase 10.000 Um2 op dag 2, 4, 6, 8, 10 en 12. Etoposide 300 mgm2 en cytarabine 300 mgm2 op dag 22, 25 en 29. Intrathecale chemotherapie wordt toegediend op dag 0, 7, 14 en 21. Na het remissie-inductieschema wordt beenmergaspiratie uitgevoerd om de morfologie te evalueren. Als minder dan 5% van de lymfoïde blasten wordt gerapporteerd, gaan de patiënten door met de consolidatiefase met hoge doses methotrexaat en 6-mercaptopurine, en daarna de onderhoudsfase tot het einde van de behandeling. het protocol.

De tussenliggende variabelen zijn het aantal perifere blasten op dag 0, morfologisch onderzoek van het beenmerg op dag 14 en aan het einde van de inductie en het einde van de inductie MRD (minimale residuele ziekte).

Metformine zal door randomisatie aan de experimentele groep worden toegediend in een dosis van 1000 mgm2 per dag, met een maximale dosis van 850 mg driemaal per dag, van dag -7 tot het einde van de remissie-inductieperiode. De afname van de perifere bloedmonsters voor bepaling van de expressie van de genen ABCB1 en AMPK zal plaatsvinden op dag -7 en aan het einde van de remissie-inductie. Follow-up van de patiënt zal worden gedaan om de globale en gebeurtenisvrije overleving te berekenen.