Účinek metforminu na expresi ABCB1 a AMPK u dospívajících s nově diagnostikovanou akutní lymfoblastickou leukémií

Akutní lymfoblastická leukémie je nejčastějším nádorovým onemocněním u dětí a dospívajících. V současnosti dosahuje kombinace chemoterapeutických látek remise u více než 90 % pacientů. Ale adolescenti mají ve srovnání s dětmi nepříznivou prognózu.

Mnohočetné geny rezistence na léky jsou dobře známé jako příčina rezistence u různých rakovin, nejdůležitější z těchto genů jsou geny rodiny ABCB, zvláště ABCB1. Tato rezistence je také hlášena u akutní lymfoblastické leukémie. Také změny v expresi genu AMPK (adenosintrifosfát) souvisí s protinádorovými účinky v buňce.

Metformin, biguanid, prokázal, že snižuje intracelulární hladiny ATP aktivací AMPK a blokádou glykoproteinu P, produktu genu ABCB1. Mnoho zpráv popsalo účinek metforminu na různé typy rakoviny. U dospělých se ukázalo, že použití metforminu je užitečné pro zlepšení celkového přežití a přežití bez příhody, související s nízkou expresí ABCB1/MDR1 (multidrug rezistence 1) a vysokou expresí AMPK.

Vyšetřovatelé navrhují, zda má metformin nějaký účinek na ABCB1/MDR1 a AMPK během fáze indukce remise u adolescentů s nově diagnostikovanou akutní lymfoblastickou leukémií.

Hypotéza: Přidá-li se metformin ke standardní chemoterapii během indukce remise u mexických adolescentů s nově diagnostikovanou akutní lymfoblastickou leukémií, dojde ke snížení hladiny exprese mRNA (messenger ribonukleid acid) genu ABCB1 a ke zvýšení exprese genu AMPK na konci indukce remise.

Tato studie předstírá hodnocení efektu přidání metforminu ke standardnímu chemoterapeutickému režimu na modifikaci exprese genů ABCB1 a AMPK během navození remise u nově diagnostikovaných adolescentů s akutní lymfoblastickou leukémií.

Také popsat hladiny exprese ABCB1 a AMPK u zdravých adolescentů a těch, u kterých byla diagnostikována akutní lymfoblastická leukémie. Porovnejte hladinu exprese těchto genů při diagnóze a na konci indukce remise; a porovnat globální přežití a přežití bez událostí na základě počáteční exprese těchto genů a použití metforminu.

Vyšetřovatelé navrhli randomizovanou otevřenou klinickou studii k porovnání modifikace exprese genů ABCB1 a AMPK u dospívajících s nově diagnostikovanou akutní lymfoblastickou leukémií u pacientů léčených konvenční chemoterapií oproti konvenční chemoterapii plus metformin 1000 mgm2SC denně během fáze indukce remise léčba.

Všichni pacienti s novou akutní lymfoblastickou leukémií ve věku 10 až 21 let jsou zváni k účasti s povoleným informovaným souhlasem. Kritéria vyloučení zahrnují pacienty s předchozím užíváním steroidů nebo jiné chemoterapie a pacienty s Downovým syndromem.

Vyšetřovatelé předstírají, že zapisují 10 pacientů do každé skupiny. Po potvrzení morfologické a cytometrické diagnózy akutní lymfoblastické leukémie jsou adolescenti pozváni k účasti s informovaným souhlasem podepsaným pacientem a zákonným zástupcem.

Vzorky jsou získávány z mononukleárních buněk z periferní krve, celková RNA (kyselina Ribonuceid) je získávána pomocí TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies). Integrita a čistota nukleové kyseliny se stanoví spektrofotometrií. RNA se zmrazí při -80ºC, dokud není potřeba. Syntéza DNAc (komplementární desoxyribonucelová kyselina) se provádí ze 2 mikrogramů RNA, přidají se oligonukleotidy, dNTP, pufr, MgCl2, KCl (chlorid draselný) a DTT (dithiothreitol), čímž se získá konečný objem 20 mikrogramů. Směs se inkubuje při 37ºC po dobu 2 minut a 1 mikrolitr inverzní transkriptázy a inkubuje se po dobu 50 minut při 37ºC. qRT-PCR (kvantitativní plymerázová řetězová reakce v reálném čase) genů se provádí pomocí testu genové exprese TaqMan®. Hladiny exprese se vypočítají pomocí metody 2-delta-delta-Ct.

Remisní indukční chemoterapie zahrnuje steroidní předfázi 7 dnů prednisonu 60 mgm2SCD. Správná fáze indukce remise spočívá v prednisonu 60 mgm2 denně od 0. do 28. dne; Vinkristin 1,5 mgm2 ve dnech 0, 7, 14 a 21; doxorubicin 25 mgm2 ve dnech 0, 7, 21; L-asparagináza 10 000 um2 ve dnech 2, 4, 6, 8, 10 a 12. Etoposid 300 mg/m2 a cytarabin 300 mg/m2 ve dnech 22, 25 a 29. Intratekální chemoterapie se podává ve dnech 0, 7, 14 a 21. Po schématu indukce remise je provedena aspirace kostní dřeně k posouzení morfologie, pokud je hlášeno méně než 5 % lymfoidních blastů, pacienti pokračují konsolidační fází vysokou dávkou methotrexátu a 6 merkaptopurinu a poté udržovací fází až do konce protokolu.

Meziproměnnými jsou počet periferních blastů v den 0, morfologické vyšetření kostní dřeně ve dnech 14 a na konci indukce a na konci indukce MRD (minimální reziduální nemoc).

Metformin bude experimentální skupině podáván randomizací v dávce 1000 mgm2 denně, s maximální dávkou 850 mg třikrát denně, ode dne -7 do konce období indukce remise. Odběr vzorků periferní krve pro stanovení exprese genů ABCB1 a AMPK bude proveden v den -7 a na konci indukce remise. Bude provedeno sledování pacienta, aby se vypočítalo celkové přežití a přežití bez událostí.