白斑の外科的治療における自家細胞移植

手術前に、2 つの同等の病変が選択されます。

病変は、以下について評価されます。

1. ポイントカウンティング技術を使用した表面積。
2. VESTAスコアを使用した色素沈着の試み。 フラクショナル レーザー CO2 リサーフェシングを使用して、局所麻酔下で病変をダーマ ブレーディングします。ドット モード オフのリサーフェシングを使用して、出力 18 ～ 20 W、滞留時間 1,000 ミリ秒で実行します (DEKA、フィレンツェ、イタリア)。 表皮が均一に除去されるまで、1 ～ 3 回のパスが実行されます。

Regenera 技術によって生成された自家細胞マイクログラフト (ACM) 懸濁液 局所麻酔下で、2.5 mm パンチ生検を使用して、Rigeneracons 医療機器 (CE 認定クラス I; 人間の脳波) を使用して、患者の後頭部から 3 つの頭皮組織標本を抽出します。 、トリノ、イタリア）。 収集された標本は、デバイスに 1.5 mL の滅菌生理的溶液を追加することによって Rigeneracons に配置されます。 デバイスは、80 RPM で 2 分間 Rigeneracons の回転によって細胞懸濁液を生成します。 その後、得られた懸濁液を追加の 3 mL 滅菌生理溶液で希釈します。 得られた懸濁液は、NCES技術によって生成されたメラノサイトペレットに添加され、ダーマブレードされた白斑パッチの1つに広げられます。

非培養表皮懸濁液 (NCES):

メラノサイトケラチノサイトペレットが調製されます。 ドナー皮膚は、病変内メピカインLで領域を麻酔した後、殿部から採取されます。コッヘルの鉗子に取り付けられた滅菌シェービング ブレードを使用します。 1:2 の拡張比は、移植されたすべての病変で同等のメラノサイト濃度を確保するために、各病変に個別に使用されました。 細胞懸濁液は、ドナー皮膚を 0.25% トリプシン-EDTA (GIBCO) 溶液に 37 °C で 40 分間入れることによって調製されます。 各サンプルとトリプシンは、ラベルの付いたペトリ皿に注がれ、リンガーの乳酸を使用して中和されます。 すべての手順は、厳密な無菌条件下で層流ベンチで実行されます。 表皮は、廃棄される真皮から切り離されます。 次に、表皮を細かく切り、表面に色素が残らないように剥がします。 その後、ラベルを付けた 2 つの滅菌ファルコン チューブに移し、1,000 rpm で 10 分間遠心分離します。 浮遊表皮断片と上澄み液が除去され、底部にメラノサイトとケラチノサイトが豊富な表皮細胞を含む細胞ペレットが残ります。 得られたペレットは、再生技術によって生成された ACM に 1 回、毛包懸濁液に 1 回、リンゲル乳酸塩 1 ml に 1 回懸濁されます。

濾胞細胞懸濁液：

• 局所麻酔下で、1 mm パンチを使用して、耳の後ろの後頭部の頭皮から毛包を抽出します。 移植する部位にもよりますが、1cm2あたり1個の色素沈着毛包を採取します。 抽出した毛包をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で約３回洗浄する。 次に、毛包を 0.25% トリプシン - 0.05% エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) とともに 37°C で 60 分間インキュベートし、3 つの間隔に分けて単一細胞懸濁液を調製します。 最初の間隔は 30 分間続き、その後、分離した細胞を含む上澄み液を新しいファルコン チューブに注ぎ、1% ウシ胎児血清で中和しました。 次に、新鮮なトリプシンを毛包に加え、15 分間 2 回再培養しました。
• このようなサイクルが 3 回終わると、細いケラチン シャフトが残ります。 すべてのチューブの細胞懸濁液が 1 つのチューブに追加されます。 最終的な細胞ペレットは、合わせた細胞懸濁液を 1000 rpm で 5 分間遠心分離することによって得られます。 得られた懸濁液は、NCES技術によって生成されたメラノサイトペレットに添加され、同等のダーマブレード病変に広げられます。

得られた懸濁液は、トリパンブルー色素排除法を使用してメラノサイト数と生存率をチェックし、ダーマブレード白斑パッチに広がる前に、レシピエント領域の250生存細胞/ mm2を超えていることを確認します。

両方の部位を乾燥コラーゲン シートで覆い、続いて無菌手術用パッドとテガダームで覆います。

患部は包帯で固定され、患者は手術部位での動きを制限するようにアドバイスされます。

患者は抗生物質の1週間のコースを開始します。 包帯は 1 週間後に除去され、患者はエキシマ レーザー セッションを週 3 回、3 か月間受けます。

患者は、1週間の最初の訪問後、3か月間毎月追跡調査されます。

3 か月で、定性的評価と定量的評価の両方が行われます。 定性的には、再色素沈着の医師による盲検評価と、連続写真を使用したカラー マッチが行われます。 定量的には、点数法と VESTA スコアを使用して再色素沈着の程度を評価します。