Enxerto Celular Autólogo no Tratamento Cirúrgico do Vitiligo

Antes da cirurgia, duas lesões comparáveis ​​serão selecionadas.

As lesões serão avaliadas para:

1. Área de superfície usando a técnica de contagem de pontos.
2. Qualquer tentativa de pigmentação usando o escore VESTA. As lesões serão derma braded sob anestesia local usando recapeamento a laser fracionado de CO2. Usando o modo de ponto desligado, o recapeamento será realizado a uma potência de 18-20 W, tempo de permanência de 1.000 milissegundos (DEKA, Florença, Itália). Serão realizadas uma a três passagens até que a epiderme seja removida uniformemente.

Suspensão de Microenxertos Celulares Autólogos (ACM) gerados pela técnica de regeneração Sob anestesia local, uma biópsia por punção de 2,5 mm será usada para extrair 3 espécimes de tecido do couro cabeludo do occipício do paciente atrás da orelha, usando o dispositivo médico Rigeneracons (certificado CE classe I; Human Brain Wave , Turim, Itália). Os espécimes coletados serão colocados em Rigeneracons adicionando 1,5 mL de solução fisiológica estéril ao dispositivo. O dispositivo então gera uma suspensão celular por rotação de Rigeneracons a 80 RPM por 2 minutos. Posteriormente, a suspensão obtida é diluída com mais 3 mL de solução fisiológica estéril. A suspensão resultante será adicionada ao pellet de melanócitos gerado pela técnica NCES e será espalhada em um dos adesivos vitiliginosos derma braded.

Suspensão Epidérmica Não Cultivada (NCES):

O pellet de queratinócitos de melanócitos será preparado. A pele do doador será colhida da região glútea após anestesia da área com Mepicaína L intralesional; usando uma lâmina de barbear estéril montada em uma pinça de Kocher. Uma taxa de expansão de 1:2 foi usada para cada lesão separadamente para garantir a concentração equivalente de melanócitos em todas as lesões transplantadas. A suspensão celular será preparada colocando a pele do doador em solução de tripsina-EDTA (GIBCO) 0,25% por 40 minutos a 37 ᴼC. Cada amostra e tripsina serão colocadas em placas de Petri rotuladas e então neutralizadas com lactato de ringer. Todas as etapas serão realizadas em bancada de fluxo de ar laminar sob rigorosas condições assépticas. A epiderme será descolada da derme que será descartada. Em seguida, a epiderme será cortada em pedaços minúsculos e raspada para que nenhum pigmento seja deixado na superfície. Em seguida, serão transferidos para dois tubos falcon estéreis rotulados e centrifugados por 10 minutos a 1.000 rpm. Os fragmentos epidérmicos flutuantes e o fluido sobrenadante serão removidos, deixando o sedimento celular contendo células epidérmicas ricas em melanócitos e queratinócitos no fundo. O pellet resultante será suspenso uma vez em ACM gerado pela técnica de regeneração, uma vez em suspensão de folículo piloso e uma vez em 1 ml de ringer lactato.

Suspensão Folicular Celular:

• Sob anestesia local, um punção de 1 mm será usado para extrair os folículos capilares do couro cabeludo occipital atrás da orelha. Dependendo da área a ser transplantada, será extraído um folículo pigmentado para cada 1 cm2. Os folículos capilares extraídos são lavados com solução salina tamponada com fosfato (PBS) por cerca de 3 vezes. Os folículos capilares são então incubados com 0,25% de tripsina - 0,05% de ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA) a 37°C por 60 minutos divididos em 3 intervalos para preparar a suspensão de célula única. O primeiro intervalo durou 30 minutos, após o que o fluido sobrenadante contendo as células separadas foi vertido para um novo tubo falcon e neutralizado com soro fetal bovino a 1%. Tripsina fresca foi então adicionada aos folículos capilares e reincubada por 15 minutos duas vezes.
• Ao final de três desses ciclos, uma fina haste queratinosa é deixada para trás. As suspensões de células de todos os tubos são adicionadas em um único tubo. O sedimento celular final é obtido por centrifugação da suspensão celular combinada a 1000 rpm por 5 min. A suspensão resultante será adicionada ao pellet de melanócitos gerado pela técnica NCES e será espalhada em uma lesão derma bradada comparável.

A suspensão resultante será verificada quanto à contagem e viabilidade de melanócitos usando o método de exclusão de corante azul de tripano para garantir acima de 250 células viáveis/mm2 da área receptora antes de sua propagação no adesivo de vitiligo braded derma.

Ambos os locais serão cobertos com uma folha de colágeno seco, seguida de almofada cirúrgica estéril e tegaderm.

A área será imobilizada após o curativo e o paciente será orientado a restringir os movimentos no local operado.

Os pacientes iniciarão um curso de 1 semana de antibióticos. Os curativos serão removidos após 1 semana, e os pacientes receberão sessões de excimer laser, 3 sessões por semana durante 3 meses.

Os pacientes serão acompanhados mensalmente por 3 meses após a primeira visita em 1 semana.

Aos 3 meses, serão feitas avaliações qualitativas e quantitativas. Qualitativamente, será feita uma avaliação cega do médico sobre a repigmentação, bem como a correspondência de cores usando fotografias seriadas. Quantitativamente, o método de contagem de pontos, bem como o escore VESTA, também serão usados ​​para avaliar o grau de repigmentação.