Autologt cellgraft vid kirurgisk behandling av vitiligo

Före operationen kommer två jämförbara lesioner att väljas ut.

Lesioner kommer att bedömas för:

1. Ytarea med hjälp av punkträkningsteknik.
2. Alla försök till pigmentering med VESTA-poäng. Lesioner kommer att genomblätas under lokalbedövning med hjälp av fraktionerad laser CO2 resurfacing. Användning av dot mode off resurfacing kommer att utföras med en effekt på 18-20 W, uppehållstid 1 000 millisekunder (DEKA, Florens, Italien). En till tre pass kommer att utföras tills epidermis avlägsnas enhetligt.

Autologous Cellular Micrografts (ACM) suspension genererad med regenera-teknik Under lokalbedövning kommer en 2,5 mm stansbiopsi att användas för att extrahera 3 hårbottenvävnadsprover från patientens nackknöl bakom örat, med hjälp av Rigeneracons medicinska utrustning (CE-certifierad klass I; Human Brain Wave , Turin, Italien). De insamlade proverna kommer att placeras i Rigeneracons genom att tillsätta 1,5 mL steril fysiologisk lösning till enheten. Enheten genererar sedan en cellulär suspension genom rotation av Rigeneracons vid 80 RPM under 2 minuter. Därefter späds den erhållna suspensionen med ytterligare 3 ml steril fysiologisk lösning. Den resulterande suspensionen kommer att läggas till melanocytpellets genererad med NCES-teknik och kommer att spridas på en av de derma-braded vitiliginösa fläckarna.

Icke odlad epidermal suspension (NCES):

Melanocytkeratinocytpellet kommer att beredas. Givarhud kommer att skördas från sätesregionen efter bedövning av området med intralesional Mepicaine L; med hjälp av ett sterilt rakblad monterat på en Kochers pincett. Ett expansionsförhållande på 1:2 användes för varje lesion separat för att säkerställa ekvivalent melanocytkoncentration i alla transplanterade lesioner. Cellsuspension kommer att beredas genom att placera donatorhuden i 0,25 % trypsin-EDTA (GIBCO) lösning i 40 minuter vid 37 ᴼC. Varje prov och trypsin kommer att hällas i en märkt petriskål och sedan neutraliseras med ringers laktat. Alla steg kommer att utföras i en laminär luftflödesbänk under strikta aseptiska förhållanden. Epidermis kommer att lossna från dermis som kommer att kasseras. Sedan skärs överhuden i små bitar och skrotas så att inget pigment finns kvar på ytan. Efteråt kommer de att överföras till två märkta sterila falkrör och centrifugeras i 10 minuter vid 1 000 rpm. De flytande epidermala fragmenten och supernatantvätskan kommer att avlägsnas och lämnar cellpelleten som innehåller epidermala celler rika på melanocyter och keratinocyter i botten. Den resulterande pelleten kommer att suspenderas en gång i ACM genererad med regenera-teknik, en gång i hårsäckssuspension och en gång i 1 ml ringers laktat.

Follikulär cellsuspension:

• Under lokalbedövning kommer 1 mm stans att användas för att extrahera hårsäckar från occipital hårbotten bakom örat. Beroende på området som ska transplanteras kommer en pigmenterad folliklar att extraheras för varje 1 cm2. De extraherade hårsäckarna tvättas med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) ca 3 gånger. Hårsäckarna inkuberas sedan med 0,25 % trypsin - 0,05 % etylendiamintetraättiksyra (EDTA) vid 37°C under 60 minuter uppdelat i 3 intervaller för att framställa encellsuspensionen. Det första intervallet varade 30 minuter varefter supernatantvätskan innehållande separerade celler hälldes i ett nytt falkrör och neutraliserades med 1 % fetalt bovint serum. Färskt trypsin sattes sedan till hårsäckarna och återinkuberades i 15 minuter två gånger.
• I slutet av tre sådana cykler lämnas ett tunt keratinöst skaft kvar. Cellsuspensionerna av alla rören tillsätts i ett enda rör. Den slutliga cellpelleten erhålls genom att centrifugera den kombinerade cellsuspensionen vid 1000 rpm under 5 min. Den resulterande suspensionen kommer att tillsättas till melanocytpellets genererad med NCES-teknik och kommer att spridas på en jämförbar dermabraded lesion.

Den resulterande suspensionen kommer att kontrolleras med avseende på melanocytantal och livsduglighet med användning av trypanblått färgexklusionsmetoden för att säkerställa över 250 livsdugliga celler/mm2 av mottagarområdet innan det sprids på det dermabrade vitiligoplåstret.

Båda platserna kommer att täckas med ett torrt kollagenark följt av steril kirurgisk dyna och tegaderm.

Området kommer att immobiliseras efter bandage och patienten kommer att uppmanas att begränsa rörelsen på det opererade stället.

Patienterna kommer att påbörja en 1-veckors antibiotikakur. Förbanden kommer att tas bort efter 1 vecka, och patienterna kommer att få excimer-lasersessioner, 3 sessioner per vecka under 3 månader.

Patienterna kommer att följas upp varje månad i 3 månader efter det första besöket vid 1 vecka.

Efter 3 månader kommer både kvalitativ och kvantitativ bedömning att göras. Kvalitativt kommer en blind läkares bedömning av repigmentering samt färgmatchning med hjälp av seriefotografier att göras. Kvantitativt kommer poängräkningsmetoden såväl som VESTA-poäng att användas för att bedöma graden av repigmentering.