Autolog cellulær graft i kirurgisk behandling av vitiligo

Før operasjonen vil to sammenlignbare lesjoner bli valgt.

Lesjoner vil bli vurdert for:

1. Overflateareal ved bruk av punkttellingsteknikk.
2. Eventuelle forsøk på pigmentering med VESTA-score. Lesjoner vil bli derma braded under lokalbedøvelse ved bruk av fraksjonert laser CO2 resurfacing. Bruk av punktmodus av resurfacing vil bli utført med en effekt på 18-20 W, oppholdstid 1000 millisekunder (DEKA, Firenze, Italia). En til tre omganger vil bli utført til epidermis er fjernet jevnt.

Autologous Cellular Micrografts (ACM) suspensjon generert ved regenera-teknikk Under lokalbedøvelse vil en 2,5 mm punchbiopsi bli brukt til å trekke ut 3 hodebunnsvevsprøver fra pasientens nakkeknøl bak øret, ved hjelp av Rgeneracons medisinske utstyr (CE-sertifisert klasse I; Human Brain Wave , Torino, Italia). De innsamlede prøvene vil bli plassert i Rigeneracons ved å tilsette 1,5 mL steril fysiologisk løsning til enheten. Enheten genererer deretter en cellulær suspensjon ved rotasjon av Rigeneracons ved 80 RPM i 2 minutter. Deretter fortynnes den oppnådde suspensjonen med ytterligere 3 ml steril fysiologisk løsning. Den resulterende suspensjonen vil bli tilsatt melanocyttpellet generert ved NCES-teknikk og vil bli spredt på en av de dermabradede vitiliginøse lappene.

Ikke dyrket epidermal suspensjon (NCES):

Melanocytt keratinocytt pellet vil bli forberedt. Donorhud vil bli høstet fra glutealregionen etter bedøvelse av området med intra-lesjonell Mepicaine L; ved å bruke et sterilt barberblad montert på en Kochers tang. Et ekspansjonsforhold på 1:2 ble brukt for hver lesjon separat for å sikre ekvivalent melanocyttkonsentrasjon i alle transplanterte lesjoner. Cellesuspensjon vil bli tilberedt ved å plassere donorhuden i 0,25 % trypsin-EDTA (GIBCO) løsning i 40 minutter ved 37 ᴼC. Hver prøve og trypsin vil helles i en merket petriskål og deretter nøytraliseres med ringers laktat. Alle trinnene vil bli utført i en laminær luftstrømsbenk under strenge aseptiske forhold. Epidermis vil løsne fra dermis som vil bli kastet. Deretter vil epidermis kuttes i bittesmå biter og kasseres slik at det ikke blir igjen pigment på overflaten. Deretter overføres de til to merkede sterile falkerør og sentrifugeres i 10 minutter ved 1000 rpm. De flytende epidermale fragmentene og supernatantvæsken vil bli fjernet, og etterlater cellepelleten som inneholder epidermale celler rike på melanocytter og keratinocytter i bunnen. Den resulterende pelleten vil bli suspendert én gang i ACM generert ved regenera-teknikk, én gang i hårsekksuspensjon og én gang i 1 ml ringer-laktat.

Follikulær cellulær suspensjon:

• Under lokalbedøvelse vil 1 mm punch bli brukt til å trekke ut hårsekker fra occipital hodebunn bak øret. Avhengig av området som skal transplanteres, vil en pigmentert follikkel ekstraheres for hver 1 cm2. De ekstraherte hårsekkene vaskes med fosfatbufret saltvann (PBS) i ca. 3 ganger. Hårsekkene inkuberes deretter med 0,25 % trypsin - 0,05 % etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) ved 37°C i 60 minutter fordelt på 3 intervaller for å fremstille enkeltcellesuspensjonen. Det første intervallet varte i 30 minutter, hvoretter supernatantvæsken inneholdende separerte celler ble helt over i et nytt falkerør og nøytralisert med 1 % føtalt storfeserum. Fersk trypsin ble deretter tilsatt hårsekkene og reinkubert i 15 minutter to ganger.
• På slutten av tre slike sykluser blir et tynt keratinøst skaft etterlatt. Cellesuspensjonene til alle rørene tilsettes i et enkelt rør. Den endelige cellepelleten oppnås ved å sentrifugere den kombinerte cellesuspensjonen ved 1000 rpm i 5 minutter. Den resulterende suspensjonen vil bli tilsatt melanocyttpellet generert ved NCES-teknikk og vil bli spredt på en sammenlignbar dermabraded lesjon.

Den resulterende suspensjonen vil bli kontrollert for melanocytttelling og levedyktighet ved å bruke trypanblått fargeeksklusjonsmetode for å sikre over 250 levedyktige celler/mm2 av mottakerområdet før det spres på dermabraded vitiligo-plasteret.

Begge steder vil bli dekket med et tørt kollagenark etterfulgt av steril kirurgisk pute og tegaderm.

Området vil bli immobilisert etter bandasjering og pasienten vil bli bedt om å begrense bevegelsen på det opererte stedet.

Pasienter vil starte en 1 ukes antibiotikakur. Bandasjer vil bli fjernet etter 1 uke, og pasienter vil få excimer-laserøkter, 3 økter per uke i 3 måneder.

Pasienter vil bli fulgt opp månedlig i 3 måneder etter første besøk ved 1 uke.

Ved 3 måneder vil det bli gjort både kvalitativ og kvantitativ vurdering. Kvalitativt vil blindet legevurdering av repigmentering samt fargetilpasning ved hjelp av seriefotografier bli gjort. Kvantitativt vil poengtellingsmetoden samt VESTA-score også bli brukt for å vurdere repigmenteringsgrad.