Greffe cellulaire autologue dans le traitement chirurgical du vitiligo

Avant la chirurgie, deux lésions comparables seront sélectionnées.

Les lésions seront évaluées pour :

1. Superficie en utilisant la technique de comptage de points.
2. Toute tentative de pigmentation en utilisant le score VESTA. Les lésions seront derma bradées sous anesthésie locale à l'aide d'un resurfaçage fractionné au laser CO2. Le resurfaçage en mode point désactivé sera effectué à une puissance de 18-20 W, temps de séjour de 1 000 millisecondes (DEKA, Florence, Italie). Un à trois passages seront effectués jusqu'à ce que l'épiderme soit éliminé uniformément.

Suspension de microgreffes cellulaires autologues (ACM) générées par la technique de regenera Sous anesthésie locale, une biopsie à l'emporte-pièce de 2,5 mm sera utilisée pour extraire 3 échantillons de tissu du cuir chevelu de l'occiput du patient derrière l'oreille, à l'aide du dispositif médical Rigeneracons (certifié CE classe I ; Human Brain Wave , Turin, Italie). Les échantillons collectés seront placés dans des Rigeneracons en ajoutant 1,5 mL de solution physiologique stérile au dispositif. L'appareil génère alors une suspension cellulaire par rotation de Rigeneracons à 80 RPM pendant 2 minutes. Par la suite, la suspension obtenue est diluée avec une solution physiologique stérile supplémentaire de 3 mL. La suspension résultante sera ajoutée au culot de mélanocytes généré par la technique NCES et sera étalée sur l'un des patchs vitiligineux derma braded.

Suspension épidermique non cultivée (NCES) :

Un culot de mélanocytes et de kératinocytes sera préparé. La peau du donneur sera prélevée de la région fessière après anesthésie de la zone avec de la mépicaïne L intra-lésionnelle ; à l'aide d'une lame de rasage stérile montée sur une pince de Kocher. Un rapport d'expansion de 1:2 a été utilisé pour chaque lésion séparément afin d'assurer une concentration équivalente de mélanocytes dans toutes les lésions transplantées. La suspension cellulaire sera préparée en plaçant la peau du donneur dans une solution à 0,25 % de trypsine-EDTA (GIBCO) pendant 40 minutes à 37 ᴼC. Chaque échantillon et la trypsine seront versés dans des boîtes de pétri étiquetées puis neutralisés à l'aide de lactate de Ringer. Toutes les étapes seront réalisées dans un banc à flux d'air laminaire dans des conditions d'asepsie strictes. L'épiderme sera détaché du derme qui sera jeté. Ensuite, l'épiderme sera coupé en petits morceaux et mis au rebut afin qu'aucun pigment ne reste à la surface. Ensuite, ils seront transférés dans deux tubes Falcon stériles étiquetés et centrifugés pendant 10 minutes à 1 000 tr/min. Les fragments épidermiques flottants et le liquide surnageant seront éliminés, laissant le culot cellulaire contenant les cellules épidermiques riches en mélanocytes et kératinocytes au fond. Le culot résultant sera mis en suspension une fois dans de l'ACM généré par la technique de régénération, une fois dans une suspension de follicule pileux et une fois dans 1 ml de lactate de Ringer.

Suspension cellulaire folliculaire :

• Sous anesthésie locale, un poinçon de 1 mm sera utilisé pour extraire les follicules pileux du cuir chevelu occipital derrière l'oreille. Selon la zone à transplanter, un follicule pigmenté sera extrait pour chaque 1 cm2. Les follicules pileux extraits sont lavés avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) environ 3 fois. Les follicules pileux sont ensuite incubés avec 0,25 % de trypsine - 0,05 % d'acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) à 37 °C pendant 60 min divisés en 3 intervalles pour préparer la suspension cellulaire unique. Le premier intervalle a duré 30 minutes, après quoi le liquide surnageant contenant les cellules séparées a été versé dans un nouveau tube Falcon et neutralisé par 1 % de sérum bovin fœtal. De la trypsine fraîche a ensuite été ajoutée aux follicules pileux et réincubée deux fois pendant 15 minutes.
• À la fin de trois cycles de ce type, il reste une fine tige kératinique. Les suspensions cellulaires de tous les tubes sont ajoutées dans un seul tube. Le culot cellulaire final est obtenu en centrifugeant la suspension cellulaire combinée à 1000 rpm pendant 5 min. La suspension résultante sera ajoutée au culot de mélanocytes généré par la technique NCES et sera étalée sur une lésion derma braded comparable.

La suspension résultante sera vérifiée pour le nombre de mélanocytes et la viabilité en utilisant la méthode d'exclusion du colorant bleu trypan pour assurer au-dessus de 250 cellules viables/mm2 de la zone receveuse avant son étalement sur le patch de vitiligo derma braded.

Les deux sites seront recouverts d'une feuille de collagène sec suivi d'un tampon chirurgical stérile et de tegaderm.

La zone sera immobilisée après le bandage et il sera conseillé au patient de limiter ses mouvements sur le site opéré.

Les patients commenceront une cure d'antibiotiques d'une semaine. Les pansements seront retirés après 1 semaine, et les patients recevront des séances de laser excimer, 3 séances par semaine pendant 3 mois.

Les patients seront suivis mensuellement pendant 3 mois après la première visite à 1 semaine.

À 3 mois, une évaluation qualitative et quantitative sera effectuée. Sur le plan qualitatif, une évaluation médicale en aveugle de la repigmentation ainsi que la correspondance des couleurs à l'aide de photographies en série seront effectuées. Quantitativement, la méthode de comptage des points ainsi que le score VESTA seront également utilisés pour évaluer le degré de repigmentation.