Autoloog celtransplantaat bij chirurgische behandeling van vitiligo

Voorafgaand aan de operatie worden twee vergelijkbare laesies geselecteerd.

Laesies worden beoordeeld op:

1. Oppervlakte met behulp van puntteltechniek.
2. Elke poging tot pigmentatie met behulp van de VESTA-score. Laesies worden onder plaatselijke verdoving met dermabrading behandeld met behulp van fractionele laser-CO2-resurfacing. Met behulp van puntmodus wordt resurfacing uitgevoerd met een vermogen van 18-20 W, verblijftijd 1.000 milliseconden (DEKA, Florence, Italië). Er worden één tot drie passages uitgevoerd totdat de opperhuid gelijkmatig is verwijderd.

Suspensie van autologe cellulaire microtransplantaten (ACM) gegenereerd door regenera-techniek Onder plaatselijke verdoving zal een ponsbiopsie van 2,5 mm worden gebruikt om 3 schedelweefselspecimens uit de achterhoofdsknobbel van de patiënt achter het oor te halen, met behulp van Rigeneracons medisch hulpmiddel (CE-gecertificeerd klasse I; Human Brain Wave , Turijn, Italië). De verzamelde monsters worden in Rigeneracons geplaatst door 1,5 ml steriele fysiologische oplossing aan het apparaat toe te voegen. Het apparaat genereert vervolgens een cellulaire suspensie door Rigeneracons gedurende 2 minuten met 80 RPM te roteren. Vervolgens wordt de verkregen suspensie verdund met nog eens 3 ml steriele fysiologische oplossing. De resulterende suspensie zal worden toegevoegd aan een melanocytenpellet die is gegenereerd door de NCES-techniek en zal worden uitgespreid op een van de met dermabramen bedekte vitiligine-pleisters.

Niet-gekweekte epidermale suspensie (NCES):

Er wordt een melanocyt-keratinocytpellet bereid. Donorhuid zal worden geoogst uit het gluteale gebied na verdoving van het gebied met intra-laesionale Mepicaine L; met behulp van een steriel scheermes gemonteerd op een Kocher-tang. Voor elke laesie afzonderlijk werd een expansieverhouding van 1:2 gebruikt om een ​​gelijkwaardige melanocytenconcentratie in alle getransplanteerde laesies te garanderen. Celsuspensie wordt bereid door de donorhuid gedurende 40 minuten bij 37 ᴼC in een 0,25% trypsine-EDTA (GIBCO)-oplossing te plaatsen. Elk monster en de trypsine worden in gelabelde petrischalen gegoten en vervolgens geneutraliseerd met ringer's lactaat. Alle stappen worden uitgevoerd in een laminaire luchtstroombank onder strikt aseptische omstandigheden. De epidermis wordt losgemaakt van de dermis die wordt weggegooid. Vervolgens wordt de opperhuid in kleine stukjes gesneden en geschraapt, zodat er geen pigment op het oppervlak achterblijft. Daarna worden ze overgebracht naar twee gelabelde steriele falcon-buisjes en gedurende 10 minuten gecentrifugeerd bij 1.000 rpm. De drijvende epidermale fragmenten en bovenstaande vloeistof worden verwijderd, waardoor de celpellet met epidermale cellen die rijk zijn aan melanocyten en keratinocyten op de bodem achterblijft. De resulterende pellet wordt eenmaal gesuspendeerd in ACM gegenereerd door regenera-techniek, eenmaal in haarzakjessuspensie en eenmaal in 1 ml ringer's lactaat.

Folliculaire cellulaire suspensie:

• Onder plaatselijke verdoving wordt een stoot van 1 mm gebruikt om de haarzakjes uit de achterhoofdshoofdhuid achter het oor te halen. Afhankelijk van het te transplanteren gebied wordt voor elke 1 cm2 één gepigmenteerde follikel geëxtraheerd. De geëxtraheerde haarzakjes worden ongeveer 3 keer gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). De haarzakjes worden vervolgens geïncubeerd met 0,25% trypsine - 0,05% ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) bij 37°C gedurende 60 min verdeeld in 3 intervallen om de enkelvoudige celsuspensie te bereiden. Het eerste interval duurde 30 minuten, waarna de bovenstaande vloeistof met gescheiden cellen in een nieuwe Falcon-buis werd gegoten en geneutraliseerd door 1% foetaal runderserum. Vervolgens werd verse trypsine aan de haarzakjes toegevoegd en tweemaal 15 minuten opnieuw geïncubeerd.
• Aan het einde van drie van dergelijke cycli blijft een dunne keratineschacht achter. De celsuspensies van alle buisjes worden in één buisje toegevoegd. De uiteindelijke celpellet wordt verkregen door de gecombineerde celsuspensie gedurende 5 minuten bij 1000 rpm te centrifugeren. De resulterende suspensie zal worden toegevoegd aan een melanocytpellet die is gegenereerd met de NCES-techniek en zal worden verspreid over een vergelijkbare dermabraded laesie.

De resulterende suspensie zal worden gecontroleerd op melanocytentelling en levensvatbaarheid met behulp van de trypaanblauwe kleurstofuitsluitingsmethode om zeker te zijn van meer dan 250 levensvatbare cellen/mm2 van het ontvangende gebied voordat het wordt verspreid op de dermabraded vitiligo-pleister.

Beide plaatsen worden bedekt met een droog collageenvel, gevolgd door een steriel chirurgisch kompres en tegaderm.

Het gebied wordt geïmmobiliseerd na het verbinden en de patiënt wordt geadviseerd om de bewegingsvrijheid op de plaats van de operatie te beperken.

Patiënten beginnen met een antibioticakuur van 1 week. De verbanden worden na 1 week verwijderd en patiënten krijgen excimerlasersessies, 3 sessies per week gedurende 3 maanden.

Patiënten zullen gedurende 3 maanden maandelijks worden opgevolgd na het eerste bezoek na 1 week.

Na 3 maanden vindt zowel een kwalitatieve als een kwantitatieve beoordeling plaats. Kwalitatief zal een geblindeerde beoordeling door een arts van repigmentatie en kleurovereenkomst met behulp van seriële foto's worden uitgevoerd. Kwantitatief zullen zowel de puntentelmethode als de VESTA-score worden gebruikt om de mate van repigmentatie te beoordelen.