Autolog cellulær graft i kirurgisk behandling af vitiligo

Inden operationen vil to sammenlignelige læsioner blive udvalgt.

Læsioner vil blive vurderet for:

1. Overfladeareal ved hjælp af punkttællingsteknik.
2. Ethvert forsøg på pigmentering ved hjælp af VESTA-score. Læsioner vil blive derma braded under lokalbedøvelse ved hjælp af fraktioneret laser CO2 resurfacing. Brug af dot mode off resurfacing vil blive udført ved en effekt på 18-20 W, opholdstid 1.000 millisekunder (DEKA, Firenze, Italien). En til tre omgange vil blive udført, indtil epidermis er fjernet ensartet.

Autologe cellulære mikrotransplantater (ACM) suspension genereret ved regenera-teknik Under lokalbedøvelse vil en 2,5 mm punch-biopsi blive brugt til at udtrække 3 hovedbundsvævsprøver fra patientens nakkeknude bag øret ved hjælp af Rgeneracons medicinsk udstyr (CE-certificeret klasse I; Human Brain Wave) , Torino, Italien). De indsamlede prøver placeres i Rigeneracons ved at tilsætte 1,5 ml steril fysiologisk opløsning til enheden. Enheden genererer derefter en cellulær suspension ved rotation af Rigeneracons ved 80 RPM i 2 minutter. Efterfølgende fortyndes den opnåede suspension med yderligere 3 ml steril fysiologisk opløsning. Den resulterende suspension vil blive tilsat til melanocytpellet genereret ved NCES teknik og vil blive spredt på et af de derma braded vitiliginøse plastre.

Ikke-dyrket epidermal suspension (NCES):

Melanocyt keratinocyt pellet vil blive forberedt. Donorhud vil blive høstet fra glutealregionen efter bedøvelse af området med intralæsionel Mepicaine L; ved hjælp af et sterilt barberblad monteret på en Kochers pincet. Et ekspansionsforhold på 1:2 blev anvendt for hver læsion separat for at sikre ækvivalent melanocytkoncentration i alle transplanterede læsioner. Cellesuspension vil blive forberedt ved at placere donorhuden i 0,25 % trypsin-EDTA (GIBCO) opløsning i 40 minutter ved 37 ᴼC. Hver prøve og trypsin vil blive hældt i en mærket petriskål og derefter neutraliseret ved hjælp af ringers laktat. Alle trin udføres i en laminær luftstrømsbænk under strenge aseptiske forhold. Epidermis vil blive løsrevet fra dermis, som vil blive kasseret. Derefter vil epidermis blive skåret i bittesmå stykker og skrottet, så der ikke er pigment tilbage på overfladen. Bagefter vil de blive overført til to mærkede sterile falkrør og centrifugeret i 10 minutter ved 1.000 rpm. De flydende epidermale fragmenter og supernatantvæsken vil blive fjernet, hvilket efterlader cellepelleten indeholdende epidermale celler rige på melanocytter og keratinocytter i bunden. Den resulterende pellet vil blive suspenderet én gang i ACM genereret ved regenera-teknik, én gang i hårfollikelsuspension og én gang i 1 ml ringers laktat.

Follikulær cellulær suspension:

• Under lokalbedøvelse vil 1 mm punch blive brugt til at udtrække hårsække fra occipital hovedbund bag øret. Afhængigt af det område, der skal transplanteres, vil en pigmenteret follikler blive ekstraheret for hver 1 cm2. De ekstraherede hårfollikler vaskes med phosphatpufret saltvand (PBS) i ca. 3 gange. Hårsækkene inkuberes derefter med 0,25 % trypsin - 0,05 % ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) ved 37°C i 60 minutter opdelt i 3 intervaller for at fremstille enkeltcellesuspensionen. Det første interval varede 30 minutter, hvorefter supernatantvæsken indeholdende adskilte celler blev hældt i et nyt falkerør og neutraliseret med 1% føtalt bovint serum. Frisk trypsin blev derefter tilsat til hårsækkene og genkuberet i 15 minutter to gange.
• Ved afslutningen af ​​tre sådanne cyklusser efterlades et tyndt keratinøst skaft. Cellesuspensionerne af alle rørene tilsættes i et enkelt rør. Den endelige cellepellet opnås ved at centrifugere den kombinerede cellesuspension ved 1000 rpm i 5 min. Den resulterende suspension vil blive tilsat til melanocytpellet genereret ved NCES teknik og vil blive spredt på en sammenlignelig derma braded læsion.

Den resulterende suspension vil blive kontrolleret for melanocyttal og levedygtighed ved hjælp af trypanblåt farveeksklusionsmetode for at sikre over 250 levedygtige celler/mm2 af modtagerområdet før det spredes på det derma braded vitiligo-plaster.

Begge steder vil blive dækket med et tørt kollagenark efterfulgt af steril kirurgisk pude og tegaderm.

Området vil blive immobiliseret efter bandagering, og patienten vil blive rådet til at begrænse bevægelsen på det opererede sted.

Patienterne vil påbegynde et 1-uges forløb med antibiotika. Forbindinger vil blive fjernet efter 1 uge, og patienter vil modtage excimer laser sessioner, 3 sessioner om ugen i 3 måneder.

Patienterne vil blive fulgt op månedligt i 3 måneder efter det første besøg ved 1 uge.

Efter 3 måneder foretages både kvalitativ og kvantitativ vurdering. Kvalitativt vil der blive foretaget en blindet lægevurdering af repigmentering samt farvematch ved hjælp af seriefotografier. Kvantitativt vil pointoptællingsmetoden samt VESTA-score også blive brugt til at vurdere graden af ​​repigmentering.