Autologinen solusiirrännäinen vitiligon kirurgisessa hoidossa

Ennen leikkausta valitaan kaksi vertailukelpoista leesiota.

Leesioita arvioidaan:

1. Pinta-ala käyttäen pistelaskentatekniikkaa.
2. Kaikki pigmentaatioyritykset VESTA-pisteillä. Leesiot päällystetään ihona paikallispuudutuksessa käyttämällä fraktiolaser-CO2-pinnoitusta. Pistemoodia käyttämällä pinnoitus suoritetaan 18-20 W teholla, viipymäaika 1 000 millisekuntia (DEKA, Firenze, Italia). Ajoa suoritetaan yhdestä kolmeen, kunnes orvaskesi on poistettu tasaisesti.

Autologiset solumikrosiirteet (ACM) -suspensio, joka on tuotettu regenera-tekniikalla Paikallispuudutuksessa 2,5 mm:n biopsialla otetaan 3 päänahan kudosnäytettä potilaan niskakyhmystä korvan takaa käyttäen Rigeneraconsin lääketieteellistä laitetta (CE-sertifioitu luokka I; Human Brain Wave) , Torino, Italia). Kerätyt näytteet sijoitetaan Rigeneraconsiin lisäämällä laitteeseen 1,5 ml steriiliä fysiologista liuosta. Laite tuottaa sitten solususpension pyörittämällä Rigeneraconeja nopeudella 80 rpm 2 minuutin ajan. Sen jälkeen saatu suspensio laimennetaan vielä 3 ml:lla steriiliä fysiologista liuosta. Tuloksena oleva suspensio lisätään NCES-tekniikalla tuotettuun melanosyyttipellettiin ja levitetään yhdelle derma-kalvotuista vitiliginous-laastareista.

Viljelmätön epidermaalinen suspensio (NCES):

Melanosyyttikeratinosyyttipelletti valmistetaan. Luovuttajan iho kerätään pakaraalueelta sen jälkeen, kun alue on nukutettu leesion sisäisellä Mepicaine L:llä; käyttämällä steriiliä parranajoterää, joka on asennettu Kocherin pihdeille. Laajenemissuhdetta 1:2 käytettiin kullekin vauriolle erikseen, jotta varmistettiin vastaava melanosyyttipitoisuus kaikissa siirretyissä leesioissa. Solususpensio valmistetaan asettamalla luovuttajan iho 0,25 % trypsiini-EDTA (GIBCO) -liuokseen 40 minuutiksi 37 °C:ssa. Jokainen näyte ja trypsiini kaadetaan merkittyihin petrimaljoihin ja neutraloidaan sitten Ringerin laktaatin avulla. Kaikki vaiheet suoritetaan laminaarisessa ilmavirtauspenkissä tiukoissa aseptisissa olosuhteissa. Epidermis irtoaa verinahasta, joka heitetään pois. Sitten orvaskesi leikataan pieniksi paloiksi ja romutetaan niin, että pintaan ei jää pigmenttiä. Sen jälkeen ne siirretään kahteen merkittyyn steriiliin haukkaputkeen ja sentrifugoidaan 10 minuuttia 1000 rpm. Kelluvat epidermaaliset fragmentit ja supernatanttineste poistetaan, jolloin solupelletti, joka sisältää runsaasti melanosyyttejä ja keratinosyyttejä sisältäviä epidermaalisoluja, jää pohjaan. Saatu pelletti suspendoidaan kerran regenera-tekniikalla tuotettuun ACM:ään, kerran karvatuppisuspensioon ja kerran 1 ml:aan Ringerin laktaattia.

Follikulaarinen solususpensio:

• Paikallispuudutuksessa käytetään 1 mm:n lyöntiä karvatuppien poistamiseen takaraivopäänahasta korvan takaa. Siirrettävästä alueesta riippuen kutakin 1 cm2:ää kohden uutetaan yksi pigmentoitunut follikkelia. Uutetut karvatupet pestään fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) noin 3 kertaa. Sitten karvatupet inkuboidaan 0,25 % trypsiini - 0,05 % etyleenidiamiinitetraetikkahapon (EDTA) kanssa 37 °C:ssa 60 minuuttia jaettuna 3 väliin yksisolususpension valmistamiseksi. Ensimmäinen aikaväli kesti 30 minuuttia, jonka jälkeen erotettuja soluja sisältävä supernatanttineste kaadettiin uuteen haukkaputkeen ja neutraloitiin 1 %:lla naudan sikiön seerumia. Sitten tuoretta trypsiiniä lisättiin karvatupiin ja inkuboitiin uudelleen 15 minuuttia kahdesti.
• Kolmen tällaisen syklin lopussa jäljelle jää ohut keratiinivarsi. Kaikkien putkien solususpensiot lisätään yhteen putkeen. Lopullinen solupelletti saadaan sentrifugoimalla yhdistettyä solususpensiota nopeudella 1000 rpm 5 minuutin ajan. Tuloksena oleva suspensio lisätään NCES-tekniikalla tuotettuun melanosyyttipellettiin ja levitetään vastaavalle derma-leesiolle.

Tuloksena oleva suspensio tarkastetaan melanosyyttien määrän ja elinkelpoisuuden suhteen käyttämällä trypaaninsinistä väriaineen poissulkemismenetelmää sen varmistamiseksi, että vastaanottajaalueella on yli 250 elävää solua/mm2 ennen sen levittämistä derma braded vitiligo -laastarin päälle.

Molemmat kohdat peitetään kuivalla kollageenikalvolla, jota seuraa steriili leikkaustyyny ja tegaderm.

Alue immobilisoidaan sidoksen jälkeen ja potilasta neuvotaan rajoittamaan liikkumista leikkauskohdassa.

Potilaat aloittavat 1 viikon antibioottikuurin. Sidokset poistetaan viikon kuluttua, ja potilaat saavat excimer laser-istuntoja, 3 kertaa viikossa 3 kuukauden ajan.

Potilaita seurataan kuukausittain 3 kuukauden ajan ensimmäisestä käynnistä viikon kuluttua.

Kolmen kuukauden kuluttua tehdään sekä laadullinen että määrällinen arviointi. Laadullisesti tehdään sokeutettu lääkärin arvio repigmentaatiosta sekä värien vastaavuudesta sarjavalokuvien avulla. Kvantitatiivisesti pistelaskentamenetelmää sekä VESTA-pistemäärää käytetään myös uudelleenpigmentaatioasteen arvioimiseen.