Injerto Celular Autólogo en el Tratamiento Quirúrgico del Vitíligo

Antes de la cirugía, se seleccionarán dos lesiones comparables.

Las lesiones se evaluarán para:

1. Área de superficie utilizando la técnica de conteo de puntos.
2. Cualquier intento de pigmentación utilizando la puntuación VESTA. Las lesiones se someterán a dermabrading bajo anestesia local utilizando láser fraccionado de CO2 para la renovación de la superficie. Se realizará una renovación de la superficie con modo de punto desactivado a una potencia de 18-20 W, con un tiempo de permanencia de 1000 milisegundos (DEKA, Florencia, Italia). Se realizarán de una a tres pasadas hasta eliminar uniformemente la epidermis.

Suspensión de Microinjertos Celulares Autólogos (ACM) generada por la técnica regenera Bajo anestesia local, se utilizará una biopsia en sacabocados de 2,5 mm para extraer 3 muestras de tejido del cuero cabelludo del occipucio detrás de la oreja del paciente, utilizando el dispositivo médico Rigeneracons (certificado CE clase I; Human Brain Wave , Turín, Italia). Las muestras recolectadas se colocarán en Rigeneracons agregando 1,5 ml de solución fisiológica estéril al dispositivo. Luego, el dispositivo genera una suspensión celular mediante la rotación de Rigeneracons a 80 RPM durante 2 minutos. Posteriormente, la suspensión obtenida se diluye con 3 mL adicionales de solución fisiológica estéril. La suspensión resultante se agregará al sedimento de melanocitos generado por la técnica NCES y se extenderá sobre uno de los parches vitiliginosos con derma braded.

Suspensión epidérmica no cultivada (NCES):

Se preparará un sedimento de queratinocitos de melanocitos. La piel del donante se recolectará de la región glútea después de anestesiar el área con Mepicaine L intralesional; utilizando una cuchilla de afeitar estéril montada en unas pinzas de Kocher. Se utilizó una relación de expansión de 1:2 para cada lesión por separado para asegurar una concentración de melanocitos equivalente en todas las lesiones trasplantadas. La suspensión celular se preparará colocando la piel del donante en una solución de tripsina-EDTA al 0,25 % (GIBCO) durante 40 minutos a 37 ᴼC. Cada muestra y la tripsina se verterán en placas de Petri etiquetadas y luego se neutralizarán con lactato de Ringer. Todos los pasos se realizarán en un banco de flujo de aire laminar bajo estrictas condiciones asépticas. Se desprenderá la epidermis de la dermis que será desechada. Luego, la epidermis se cortará en pedazos diminutos y se raspará para que no quede pigmento en la superficie. Posteriormente, se transferirán a dos tubos falcon estériles etiquetados y se centrifugarán durante 10 minutos a 1.000 rpm. Se eliminarán los fragmentos epidérmicos flotantes y el líquido sobrenadante, dejando en el fondo el sedimento celular que contiene células epidérmicas ricas en melanocitos y queratinocitos. El gránulo resultante se suspenderá una vez en ACM generado por la técnica regenera, una vez en suspensión de folículos pilosos y una vez en 1 ml de lactato de Ringer.

Suspensión Celular Folicular:

• Bajo anestesia local, se utilizará un sacabocados de 1 mm para extraer los folículos pilosos del cuero cabelludo occipital detrás de la oreja. Dependiendo de la zona a trasplantar, se extraerá un folículo pigmentado por cada 1 cm2. Los folículos pilosos extraídos se lavan con solución salina tamponada con fosfato (PBS) unas 3 veces. A continuación, los folículos pilosos se incuban con tripsina al 0,25% - ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 0,05% a 37ºC durante 60 min divididos en 3 intervalos para preparar la suspensión de células individuales. El primer intervalo duró 30 minutos, después de lo cual el líquido sobrenadante que contenía las células separadas se vertió en un tubo falcon nuevo y se neutralizó con suero bovino fetal al 1%. A continuación, se añadió tripsina fresca a los folículos pilosos y se volvió a incubar durante 15 minutos dos veces.
• Al final de tres de estos ciclos, queda un eje queratinoso delgado. Las suspensiones celulares de todos los tubos se añaden en un solo tubo. El sedimento celular final se obtiene centrifugando la suspensión celular combinada a 1000 rpm durante 5 min. La suspensión resultante se agregará al sedimento de melanocitos generado por la técnica NCES y se extenderá sobre una lesión dermobradeada comparable.

Se comprobará el recuento de melanocitos y la viabilidad de la suspensión resultante mediante el método de exclusión con colorante azul de tripán para garantizar que haya más de 250 células viables/mm2 en el área receptora antes de su aplicación en el parche de vitíligo con derma braded.

Ambos sitios se cubrirán con una lámina de colágeno seca seguida de una gasa quirúrgica estéril y tegaderm.

El área se inmovilizará después del vendaje y se recomendará al paciente que restrinja el movimiento en el sitio operado.

Los pacientes comenzarán un ciclo de antibióticos de 1 semana. Los apósitos se retirarán después de 1 semana y los pacientes recibirán sesiones de láser excimer, 3 sesiones por semana durante 3 meses.

Los pacientes serán seguidos mensualmente durante 3 meses después de la primera visita en 1 semana.

A los 3 meses se realizará una evaluación tanto cualitativa como cuantitativa. Cualitativamente, se realizará una evaluación médica cegada de la repigmentación, así como la coincidencia de color utilizando fotografías en serie. Cuantitativamente, el método de recuento de puntos y la puntuación VESTA también se utilizarán para evaluar el grado de repigmentación.