ケロイドにおける1:3型コラーゲン比およびインターロイキン10レベルに対する臍帯間葉系幹細胞、その馴化培地、およびトリアムシノロンアセトニドの腸内注射の効果：ランダム化比較試験

患者のスクリーニングは、定規を使用してケロイドの寸法を測定することによって行われました。 次に、包含基準を満たす患者をランダムに 3 つのグループに分けました。 ケロイド体積 cm3 ごとに同じ注射量 (1 ml) を、1 mL 注射器と 27G 針を使用して被験者に投与しました。 超音波誘導を使用して、面内技術を使用して病変の中心に 30 ～ 45 度の傾斜で注射を行い、すべての被験者に均一な圧力を確保しました。 グループ 1 には UC-MSC 200 万細胞/mL/cm3 を投与し、グループ 2 には UC-CM 1mL/cm3 を投与し、グループ 3 には TA 40 mg/mL/cm3 を投与しました。 UC-MSC および UC-CM を取得するために、10 cm の臍帯組織を以下の物質を含む 50 mL の輸送培地に採取しました: アムホテリシン B (最終濃度 7500 ng/ml [JR Scientific 50701])、アルファ最小必須培地(MEM [GIBCO 12000-022 1])、ペニシリン/ストレプトマイシン (最終濃度 300 U/ml [Gibco 15140-122])。 サンプルは収集後 8 時間以内に処理されました。 次に臍帯を解剖し、pH 7.4 のリン酸緩衝食塩水 (PBS [Sigma P3813]) を含む 0.5% ポビドンヨード (ベタジン ©) で簡単に洗浄し、その後 PBS で洗浄してベタジンと血液を除去しました。 臍帯を完全培地に細かく刻む前に、臍血管を切除した。 UC-CM は、Alpha-MEM およびダルベッコ改変イーグル培地 (DMEM [GIBCO 31600-034]) を使用して作成されました。 最終的な完全培地には、1% L-グルタミン (Lonza 17-605C)、10% TC (インドネシア赤十字社)、アムホテリシン B (最終濃度 2500 ng/ml)、およびペニシリン/ストレプトマイシン (最終濃度 100 U/ml) が含まれています。 MEMを作成するために、10%の自己または同種臍帯血血清および10%のヒトAB血清(Gibco 34005-100)を培養物に補充した。 12 ウェル プレート (増殖は 3.8 cm2 [Biolite]) の各ウェルを 3 つの外植片 (直径 2 ～ 5 mm) とウォートン ゼリーで満たし、続いて完全培地を数滴加えました。 各培地に対して３回の培養を行った。 プレートを 37℃、5% CO2 でインキュベートし、汚染または細胞増殖を毎日観察し、汚染されたウェルを除去しました。 外植片を付着させた後、200 ～ 500 μL の適切な培地の添加を行った。 培地の半分の除去および各培地の半分の添加を含む培地交換を２〜３日ごとに行った。 外植片を超えて細胞が増殖して９０％コンフルエンスになったことは、ＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ（ＧＩＢＣＯ １２５６３－０１１）を使用して採取するための生存率をマークする。 色素排除法を使用して、生細胞/非生細胞収量をカウントしました。 各収穫後、外植片がプレートにまだ付着している状態で、新しい適切な培地を加え、プレートを37℃、5% CO2で再インキュベートしました。 同様の処理を 2 回目以降の培養でも繰り返し、単一の外植片から複数の収穫を可能にしました。 その後、ケロイド組織の生検が最初の面会時と 17 週間後の 2 回実施されました。 解剖病理検査で評価するパラメータは、偏光レンズ下でのコラーゲン構造を評価するシリウスレッド染色と、IL-10を検査するELISA法を用いたIn Vitro定量検査です。 １型コラーゲンと３型コラーゲンの比率の変化の計算は、治療前のコラーゲンの比率を各治療後のコラーゲンの比率で割ることによって実行されました。 偏光レンズの下で視覚化すると、3 型コラーゲンは緑色の複屈折に見え、1 型コラーゲンは黄色の複屈折に見えます。 コラーゲン比は、偏光レンズ下でのシリウスレッド染色におけるコラーゲン１型とコラーゲン３型の組成を除算して求めた。