Effekten av intralesisk injektion av mesenkymala stamceller från navelsträngen, dess konditionerade medium och triamcinolonacetonid på kollagenförhållandet av typ 1:3 och interleukin-10-nivåer i keloid: en randomiserad kontrollerad studie

Screening av patienter gjordes genom att mäta keloiddimensioner med hjälp av en linjal. Patienter som uppfyllde inklusionskriterierna delades sedan slumpmässigt in i tre grupper. Samma injektionsvolym (1 ml) i varje cm3 keloidvolym gavs med en 1 ml spruta och 27G nål till försökspersonerna. Ultraljudsvägledning användes för att administrera injektionen med en in-plane-teknik i mitten av lesionen, med lutningar på 30-45 grader, vilket säkerställer enhetligt tryck i varje individ. Grupp 1 fick UC-MSC 2 miljoner celler/ml/cm3, grupp 2 fick UC-CM 1 ml/cm3 medan grupp 3 fick TA 40 mg/ml/cm3. För att erhålla UC-MSC och UC-CM samlades 10 cm navelsträngsvävnad i 50 ml transportmedium innehållande följande ämnen: amfotericin B (slutkoncentration 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), alfa-minimal essentiellt medium (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicillin/streptomycin (slutkoncentration 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Proverna bearbetades sedan inom 8 timmar efter insamling. Navelsträngen dissekerades sedan, tvättades kort i 0,5 % povidon-jod (betadine ©) med fosfatbuffrad saltlösning med pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]) och tvättades sedan i PBS för att avlägsna betadin och blod. Navelkärlen skars ut innan navelsträngen maldes till ett komplett medium. UC-CM skapades med hjälp av Alpha-MEM och Dulbeccos modifierade Eagles-medium (DMEM [GIBCO 31600-034]). Det färdiga kompletta mediet innehåller 1 % L-glutamin (Lonza 17-605C), 10 % TC (Indonesiska Röda Korset), amfotericin B (slutkoncentration 2500 ng/ml) och penicillin/streptomycin (slutkoncentration 100 U/ml). Komplettering av odling med 10 % autologt eller allogent navelsträngsblodserum och 10 % humant AB-serum (Gibco 34005-100) gjordes för att skapa MEM. Varje brunn i en platta med 12 brunnar (tillväxten är 3,8 cm2 [Biolit]) fylldes med tre explantat (diameter 2-5 mm) och Wharton's Jelly, följt av tillsats av flera droppar komplett medium. Triplikation av odling gjordes till varje medium. Plattan inkuberades vid 37°C och 5% CO2 och observerades dagligen för kontaminering eller cellulär tillväxt, i vilken de kontaminerade brunnarna avlägsnades. Efter att explantaten fästs gjordes tillsats av 200-500 µL lämpligt medium. Mediumbyten, innefattande avlägsnande av hälften av mediet och tillsats av hälften av varje medium, utfördes varannan till var tredje dag. Tillväxt av cellerna bortom explantaten med 90 % sammanflöde markerar livsduglighet för skörd med TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Färgämnesexklusionsmetod användes för att räkna utbytet av viabla/icke-viabla celler. Efter varje skörd, med explantatet fortfarande fäst vid plattan, tillsattes nytt lämpligt medium där plattan återinkuberades vid 37°C och 5 % CO2. Liknande behandling upprepades för den andra och efterföljande kulturerna, vilket möjliggjorde flera skördar från ett enda explantat. Biopsier av keloidvävnaderna utfördes sedan två gånger, vid det första mötet och 17 veckor efter. Parametrar som ska utvärderas vid anatomisk patologisk undersökning är Sirius röd färgning för att utvärdera kollagenstruktur under en polariserande lins, samt In Vitro kvantitativ undersökning med ELISA-metoden för att undersöka IL-10. Beräkning av förändringar i förhållandet mellan typ 1 och typ 3 kollagennivåer utfördes genom att dividera förhållandet kollagen före behandling från förhållandet kollagen efter varje behandling. När det visualiseras under en polariserande lins kommer kollagen typ 3 att verka grönt dubbelbrytande och kollagen typ 1 kommer att verka gult dubbelbrytande. Kollagenförhållandet erhölls genom att dela sammansättningen av kollagen typ 1 till kollagen typ 3 i Siriusröd färgning under polariserande linser.