켈로이드에서 제대간엽줄기세포, 그 조건배지 및 Triamcinolone Acetonide의 병변내 주사가 Type 1:3 Collagen Ratio와 Interleukin-10 수치에 미치는 영향: 무작위대조시험

자를 사용하여 켈로이드 치수를 측정하여 환자 선별을 수행했습니다. 포함 기준을 충족하는 환자를 무작위로 3개 그룹으로 나누었습니다. 피험자에게 1mL 주사기와 27G 바늘을 사용하여 모든 cm3 켈로이드 부피에서 동일한 주입량(1ml)을 주입했습니다. 초음파 유도를 사용하여 30-45도의 기울기로 병변 중앙에 면내 기술을 사용하여 모든 피험자에게 균일한 압력을 가하는 주사를 시행했습니다. 그룹 1에는 UC-MSC 2백만 세포/mL/cm3가 투여되었고 그룹 2에는 UC-CM 1mL/cm3가 투여되었으며 그룹 3에는 TA 40 mg/mL/cm3가 투여되었습니다. UC-MSC 및 UC-CM을 얻기 위해 amphotericin B(최종 농도 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), 알파 최소 필수 배지를 포함하는 50 mL 수송 배지에 10 cm의 제대 조직을 수집했습니다. (MEM [GIBCO 12000-022 1]), 페니실린/스트렙토마이신(최종 농도 300 U/ml [Gibco 15140-122]). 샘플은 수집 후 8시간 이내에 처리되었습니다. 이어서 탯줄을 절개하고, pH 7.4의 인산완충식염수(PBS[Sigma P3813])를 함유한 0.5% 포비돈 요오드(베타딘 ©)로 간단히 세척한 다음, 베타딘과 혈액을 제거하기 위해 PBS로 세척하였다. 탯줄이 완전한 배지로 잘려지기 전에 탯줄 혈관이 절제되었다. UC-CM은 Alpha-MEM 및 Dulbecco의 수정된 Eagles 배지(DMEM [GIBCO 31600-034])를 사용하여 생성되었습니다. 최종 완성 배지는 1% L-글루타민(Lonza 17-605C), 10% TC(인도네시아 적십자), 암포테리신 B(최종 농도 2500ng/ml) 및 페니실린/스트렙토마이신(최종 농도 100U/ml)을 포함합니다. 10% 자가 또는 동종이계 제대혈 혈청 및 10% 인간 AB 혈청(Gibco 34005-100)으로 배양액을 보충하여 MEM을 생성했습니다. 12-웰 플레이트의 각 웰(성장은 3.8cm2[Biolite])에 3개의 외식편(직경 2-5mm)과 Wharton's Jelly를 채우고 몇 방울의 완전 배지를 첨가했습니다. 각 배지에 대해 3회 배양을 하였다. 플레이트를 37°C 및 5% CO2에서 배양하고 매일 오염 또는 세포 성장을 관찰하고 오염된 웰을 제거했습니다. 외식편을 부착한 후 적절한 배지를 200~500μL 추가했습니다. 배지의 절반을 제거하고 각 배지의 절반을 추가하는 것을 포함하는 배지 교환은 2-3일마다 수행되었습니다. 90% 합류가 있는 외식편을 넘어서는 세포의 성장은 TrypLE Select(GIBCO 12563-011)를 사용하여 수확을 위한 생존력을 표시합니다. 생존 가능/비 생존 세포 수율을 계산하기 위해 염료 배제 방법을 사용했습니다. 각각의 수확 후, 외식편이 여전히 플레이트에 부착된 상태에서 새로운 적절한 배지를 추가하고 플레이트를 37°C 및 5% CO2에서 재인큐베이션했습니다. 두 번째 및 후속 배양에 대해 유사한 처리를 반복하여 단일 외식편에서 여러 번 수확할 수 있었습니다. 켈로이드 조직의 생검은 첫 번째 회의와 17주 후에 두 번 수행되었습니다. 해부학적 병리학적 검사에서 평가해야 할 매개변수는 편광렌즈 하에서 콜라겐 구조를 평가하기 위한 Sirius red 염색과 IL-10을 검사하기 위한 ELISA 방법을 이용한 In Vitro 정량 검사입니다. 1형 대 3형 콜라겐 수준의 비율 변화 계산은 치료 전 콜라겐 비율을 각 치료 후 콜라겐 비율로 나누어 수행했습니다. 편광 렌즈 아래에서 볼 때 3형 콜라겐은 녹색 복굴절로 나타나고 1형 콜라겐은 노란색 복굴절로 나타납니다. 콜라겐 비율은 편광렌즈 하의 시리우스 레드 염색에서 콜라겐 1형과 콜라겐 3형의 조성을 나누어 구하였다.