O efeito da injeção intralesiana de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical, seu meio condicionado e acetonido de triancinolona na proporção de colágeno tipo 1:3 e níveis de interleucina-10 em queloide: um estudo controlado randomizado

A triagem dos pacientes foi feita medindo as dimensões do quelóide usando uma régua. Os pacientes que atenderam aos critérios de inclusão foram divididos aleatoriamente em 3 grupos. O mesmo volume de injeção (1 ml) em cada cm3 de volume de quelóide foi administrado com uma seringa de 1 ml e agulha 27G aos sujeitos. A orientação por ultrassom foi usada para administrar a injeção usando uma técnica no plano no centro da lesão, com inclinações de 30-45 graus, garantindo pressão uniforme em todos os indivíduos. O grupo 1 recebeu UC-MSC 2 milhões de células/mL/cm3, o grupo 2 recebeu UC-CM 1mL/cm3 enquanto o grupo 3 recebeu TA 40 mg/mL/cm3. Para obter UC-MSC e UC-CM, 10 cm de tecido do cordão umbilical foram coletados em 50 mL de meio de transporte contendo as seguintes substâncias: anfotericina B (Concentração final 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), meio essencial alfa mínimo (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicilina/estreptomicina (concentração final 300 U/ml [Gibco 15140-122]). As amostras foram então processadas dentro de 8 horas após a coleta. O cordão umbilical foi então dissecado, lavado brevemente em iodopovidona a 0,5% (betadine ©) com solução salina tamponada com fosfato de pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]) e depois lavado em PBS para remover betadine e sangue. Os vasos umbilicais foram excisados ​​antes do cordão umbilical ser triturado em um meio completo. UC-CM foi criado usando Alpha-MEM e meio Eagles modificado de Dulbecco (DMEM [GIBCO 31600-034]). O meio completo finalizado contém 1% de L-glutamina (Lonza 17-605C), 10% TC (Cruz Vermelha da Indonésia), anfotericina B (concentração final 2500 ng/ml) e penicilina/estreptomicina (concentração final 100 U/ml). A suplementação da cultura com 10% de soro de sangue de cordão autólogo ou alogênico e 10% de soro AB humano (Gibco 34005-100) foi feita para criar MEM. Cada poço de uma placa de 12 poços (crescimento de 3,8 cm2 [Biolite]) foi preenchido com três explantes (diâmetro de 2-5 mm) e geléia de Wharton, seguido pela adição de várias gotas de meio completo. A triplicação da cultura foi feita para cada meio. A placa foi incubada a 37°C e 5% de CO2 e observada diariamente para contaminação ou crescimento celular, em que os poços contaminados foram removidos. Após a fixação dos explantes, foi feita a adição de 200-500 µL de meio apropriado. Mudanças de meio, envolvendo remoção de metade do meio e adição de metade de cada meio, foram realizadas a cada 2-3 dias. O crescimento das células além dos explantes com 90% de confluência marca a viabilidade para colheita usando TrypLE Select (GIBCO 12563-011). O método de exclusão de corantes foi usado para contar o rendimento de células viáveis/não viáveis. Após cada colheita, com o explante ainda aderido à placa, foi adicionado novo meio apropriado com a placa sendo reincubada a 37°C e 5% de CO2. Tratamento semelhante foi repetido para a segunda cultura e subsequentes, permitindo colheitas múltiplas de um único explante. Biópsias dos tecidos quelóides foram então realizadas duas vezes, no primeiro encontro e 17 semanas depois. Os parâmetros a serem avaliados no exame anatomopatológico são a coloração de Sirius red para avaliar a estrutura do colágeno sob uma lente polarizadora, bem como o exame quantitativo In Vitro usando o método ELISA para examinar a IL-10. O cálculo das alterações na proporção dos níveis de colágeno tipo 1 para tipo 3 foi realizado dividindo a proporção de colágeno antes do tratamento da proporção de colágeno após cada tratamento. Quando visualizado sob uma lente polarizadora, o colágeno tipo 3 aparecerá com birrefringência verde e o colágeno tipo 1 aparecerá com birrefringência amarela. A proporção de colágeno foi obtida dividindo-se a composição de colágeno tipo 1 para colágeno tipo 3 na coloração de vermelho Sirius sob lentes polarizadas.