L'effet de l'injection intralésienne de cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical, de son milieu conditionné et d'acétonide de triamcinolone sur le rapport de collagène de type 1: 3 et les niveaux d'interleukine-10 dans les chéloïdes : un essai contrôlé randomisé

Le dépistage des patients a été effectué en mesurant les dimensions des chéloïdes à l'aide d'une règle. Les patients répondant aux critères d'inclusion ont ensuite été répartis au hasard en 3 groupes. Le même volume d'injection (1 ml) dans chaque volume de chéloïdes cm3 a été administré aux sujets à l'aide d'une seringue de 1 ml et d'une aiguille 27G. Le guidage échographique a été utilisé pour administrer l'injection en utilisant une technique dans le plan au centre de la lésion, avec des inclinaisons de 30 à 45 degrés, assurant une pression uniforme chez chaque sujet. Le groupe 1 a reçu UC-MSC 2 millions de cellules/mL/cm3, le groupe 2 reçoit UC-CM 1mL/cm3 tandis que le groupe 3 a reçu TA 40 mg/mL/cm3. Afin d'obtenir UC-MSC et UC-CM, 10 cm de tissu de cordon ombilical ont été prélevés dans 50 ml de milieu de transport contenant les substances suivantes : amphotéricine B (concentration finale 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), milieu essentiel alpha minimal (MEM [GIBCO 12000-022 1]), pénicilline/streptomycine (concentration finale 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Les échantillons ont ensuite été traités dans les 8 heures suivant le prélèvement. Le cordon ombilical a ensuite été disséqué, brièvement lavé dans de la povidone iodée à 0,5 % (bétadine ©) avec une solution saline tamponnée au phosphate de pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]), puis lavé dans du PBS pour éliminer la bétadine et le sang. Les vaisseaux ombilicaux ont été excisés avant que le cordon ombilical ne soit haché dans un milieu complet. UC-CM a été créé en utilisant Alpha-MEM et le milieu Eagles modifié de Dulbecco (DMEM [GIBCO 31600-034]). Le milieu complet finalisé contient 1 % de L-glutamine (Lonza 17-605C), 10 % de TC (Croix-Rouge indonésienne), de l'amphotéricine B (concentration finale 2500 ng/ml) et de la pénicilline/streptomycine (concentration finale 100 U/ml). La supplémentation de la culture avec 10 % de sérum de sang de cordon autologue ou allogénique et 10 % de sérum AB humain (Gibco 34005-100) a été effectuée pour créer le MEM. Chaque puits d'une plaque à 12 puits (croissance de 3,8 cm2 [Biolite]) a été rempli avec trois explants (diamètre 2-5 mm) et de la gelée de Wharton, suivi de l'ajout de plusieurs gouttes de milieu complet. Une triplication de la culture a été effectuée sur chaque milieu. La plaque a été incubée à 37°C et 5% de CO2 et observée quotidiennement pour la contamination ou la croissance cellulaire, dans laquelle les puits contaminés ont été retirés. Une fois les explants attachés, l'ajout de 200 à 500 µL de milieu approprié a été effectué. Des changements de milieu, impliquant le retrait de la moitié du milieu et l'ajout de la moitié de chaque milieu, ont été effectués tous les 2-3 jours. La croissance des cellules au-delà des explants avec 90 % de confluence marque la viabilité pour la récolte à l'aide de TrypLE Select (GIBCO 12563-011). La méthode d'exclusion de colorant a été utilisée pour compter le rendement des cellules viables/non viables. Après chaque récolte, avec l'expiant toujours attaché à la plaque, un nouveau milieu approprié a été ajouté, la plaque étant réincubée à 37°C et 5% de CO2. Un traitement similaire a été répété pour la deuxième culture et les suivantes, permettant des récoltes multiples à partir d'un seul explant. Des biopsies des tissus chéloïdes ont ensuite été réalisées à deux reprises, lors de la première séance et 17 semaines après. Les paramètres à évaluer dans l'examen d'anatomopathologie sont la coloration au rouge Sirius pour évaluer la structure du collagène sous une lentille polarisante, ainsi que l'examen quantitatif in vitro utilisant la méthode ELISA pour examiner l'IL-10. Le calcul des changements dans le rapport des niveaux de collagène de type 1 à type 3 a été effectué en divisant le rapport de collagène avant traitement par le rapport de collagène après chaque traitement. Lorsqu'il est visualisé sous une lentille polarisante, le collagène de type 3 apparaîtra en biréfringence verte et le collagène de type 1 apparaîtra en biréfringence jaune. Le ratio de collagène a été obtenu en divisant la composition de collagène de type 1 à collagène de type 3 en coloration au rouge Sirius sous verres polarisants.