Effekten av intralesisk injeksjon av navlestrengens mesenkymale stamceller, dets kondisjonerte medium og triamcinolonacetonid på type 1:3 kollagenforhold og interleukin-10 nivåer i keloid: et randomisert kontrollert forsøk

Screening av pasienter ble gjort ved å måle keloiddimensjoner ved hjelp av en linjal. Pasienter som oppfyller inklusjonskriteriene ble deretter tilfeldig delt inn i 3 grupper. Samme injeksjonsvolum (1 ml) i hvert cm3 keloidvolum ble gitt ved bruk av en 1 ml sprøyte og 27G nål til forsøkspersonene. Ultralydveiledning ble brukt til å administrere injeksjonen ved å bruke en in-plane-teknikk inn i midten av lesjonen, med helninger på 30-45 grader, noe som sikrer jevnt trykk i hvert individ. Gruppe 1 fikk UC-MSC 2 millioner celler/mL/cm3, gruppe 2 fikk UC-CM 1mL/cm3 mens gruppe 3 fikk TA 40 mg/ml/cm3. For å oppnå UC-MSC og UC-CM ble 10 cm navlestrengsvev samlet i 50 ml transportmedium som inneholdt følgende stoffer: amfotericin B (sluttkonsentrasjon 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), alfa-minimal essensielt medium (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicillin/streptomycin (sluttkonsentrasjon 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Prøvene ble deretter behandlet innen 8 timer etter innsamling. Navlestrengen ble deretter dissekert, kort vasket i 0,5 % povidon-jod (betadin ©) med fosfatbufret saltvann med pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]), og deretter vasket i PBS for å fjerne betadin og blod. Navlekarene ble skåret ut før navlestrengen ble hakket til et komplett medium. UC-CM ble opprettet ved bruk av Alpha-MEM og Dulbeccos modifiserte Eagles-medium (DMEM [GIBCO 31600-034]). Det ferdige komplette mediet inneholder 1 % L-glutamin (Lonza 17-605C), 10 % TC (Indonesisk Røde Kors), amfotericin B (sluttkonsentrasjon 2500 ng/ml) og penicillin/streptomycin (sluttkonsentrasjon 100 U/ml). Supplement av kultur med 10 % autologt eller allogent navlestrengsblodserum og 10 % humant AB-serum (Gibco 34005-100) ble gjort for å lage MEM. Hver brønn i en 12-brønns plate (veksten er 3,8 cm2 [Biolitt]) ble fylt med tre eksplantater (diameter 2-5 mm) og Wharton's Jelly, etterfulgt av tilsetning av flere dråper komplett medium. Triplisering av kultur ble gjort til hvert medium. Platen ble inkubert ved 37°C og 5 % CO2 og observert daglig for kontaminering eller cellulær vekst, hvor de forurensede brønnene ble fjernet. Etter at eksplantatene var festet, ble det tilsatt 200-500 µL passende medium. Middels endringer, som involverer fjerning av halvparten av mediet og tilsetning av halvparten av hvert medium, ble utført hver 2.-3. dag. Vekst av cellene utover eksplantatene med 90 % konfluens markerer levedyktighet for høsting ved bruk av TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Fargestoffeksklusjonsmetode ble brukt for å telle det levedyktige/ikke-levedyktige celleutbyttet. Etter hver høsting, med eksplantatet fortsatt festet til platen, ble nytt passende medium tilsatt med platen som ble re-inkubert ved 37°C og 5 % CO2. Tilsvarende behandling ble gjentatt for den andre og påfølgende kulturer, noe som muliggjorde flere høstinger fra en enkelt eksplantat. Biopsier av keloidvevet ble deretter utført to ganger, i det første møtet og 17 uker etter. Parametere som skal evalueres i anatomisk patologiundersøkelse er Sirius rødfarging for å evaluere kollagenstruktur under en polariserende linse, samt In Vitro kvantitativ undersøkelse ved bruk av ELISA-metoden for å undersøke IL-10. Beregning av endringer i forholdet mellom type 1 og type 3 kollagennivåer ble utført ved å dele forholdet kollagen før behandling fra forholdet kollagen etter hver behandling. Når visualisert under en polariserende linse, vil type-3 kollagen virke grønn-dobbeltbrytende og type-1 kollagen vil virke gul-dobbeltbrytende. Kollagenforholdet ble oppnådd ved å dele sammensetningen av kollagen type 1 til kollagen type 3 i Sirius-rødfarging under polariserende linser.