Die Wirkung der intralesischen Injektion von mesenchymalen Stammzellen aus der Nabelschnur, ihrem konditionierten Medium und Triamcinolonacetonid auf das Kollagenverhältnis Typ 1:3 und die Interleukin-10-Spiegel im Keloid: Eine randomisierte kontrollierte Studie

Das Screening der Patienten erfolgte durch Messung der Keloidgröße mit einem Lineal. Patienten, die die Einschlusskriterien erfüllten, wurden dann nach dem Zufallsprinzip in drei Gruppen eingeteilt. Den Probanden wurde mit einer 1-ml-Spritze und einer 27G-Nadel das gleiche Injektionsvolumen (1 ml) pro cm3 Keloidvolumen verabreicht. Mithilfe von Ultraschallführung wurde die Injektion mit einer In-Plane-Technik in die Mitte der Läsion verabreicht, mit Neigungen von 30–45 Grad, um einen gleichmäßigen Druck bei jedem Probanden zu gewährleisten. Gruppe 1 erhielt UC-MSC 2 Millionen Zellen/ml/cm3, Gruppe 2 erhielt UC-CM 1 ml/cm3, während Gruppe 3 TA 40 mg/ml/cm3 verabreicht wurde. Um UC-MSC und UC-CM zu erhalten, wurden 10 cm Nabelschnurgewebe in 50 ml Transportmedium gesammelt, das die folgenden Substanzen enthielt: Amphotericin B (Endkonzentration 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), essentielles Alpha-Minimalmedium (MEM [GIBCO 12000-022 1]), Penicillin/Streptomycin (Endkonzentration 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Die Proben wurden dann innerhalb von 8 Stunden nach der Entnahme verarbeitet. Anschließend wurde die Nabelschnur präpariert, kurz in 0,5 % Povidon-Jod (Betadin ©) mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung mit einem pH-Wert von 7,4 (PBS [Sigma P3813]) gewaschen und dann in PBS gewaschen, um Betadin und Blut zu entfernen. Die Nabelgefäße wurden herausgeschnitten, bevor die Nabelschnur zu einem vollständigen Medium zerkleinert wurde. UC-CM wurde unter Verwendung von Alpha-MEM und Dulbeccos modifiziertem Eagles-Medium (DMEM [GIBCO 31600-034]) erstellt. Das fertige Komplettmedium enthält 1 % L-Glutamin (Lonza 17-605C), 10 % TC (Indonesisches Rotes Kreuz), Amphotericin B (Endkonzentration 2500 ng/ml) und Penicillin/Streptomycin (Endkonzentration 100 U/ml). Um MEM zu erzeugen, wurde die Kultur mit 10 % autologem oder allogenem Nabelschnurblutserum und 10 % menschlichem AB-Serum (Gibco 34005-100) ergänzt. Jede Vertiefung einer Platte mit 12 Vertiefungen (Wachstum 3,8 cm2 [Biolite]) wurde mit drei Explantaten (Durchmesser 2–5 mm) und Wharton-Gelee gefüllt, gefolgt von der Zugabe mehrerer Tropfen Vollmedium. Für jedes Medium wurde eine Verdreifachung der Kultur durchgeführt. Die Platte wurde bei 37 °C und 5 % CO2 inkubiert und täglich auf Kontamination oder Zellwachstum untersucht, wobei die kontaminierten Vertiefungen entfernt wurden. Nach dem Anbringen der Explantate erfolgte die Zugabe von 200–500 µL geeignetem Medium. Alle 2–3 Tage wurde ein Mediumwechsel durchgeführt, bei dem die Hälfte des Mediums entfernt und die Hälfte jedes Mediums hinzugefügt wurde. Das Wachstum der Zellen über die Explantate hinaus mit einer Konfluenz von 90 % markiert die Lebensfähigkeit für die Ernte mit TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Die Farbstoffausschlussmethode wurde verwendet, um die Ausbeute lebensfähiger/nicht lebensfähiger Zellen zu zählen. Nach jeder Ernte, während das Explantat noch an der Platte befestigt war, wurde neues geeignetes Medium hinzugefügt und die Platte erneut bei 37 °C und 5 % CO2 inkubiert. Eine ähnliche Behandlung wurde für die zweite und die folgenden Kulturen wiederholt, wodurch mehrere Ernten aus einem einzigen Explantat möglich wurden. Anschließend wurden zweimal Biopsien des Keloidgewebes durchgeführt, beim ersten Treffen und 17 Wochen danach. Bei der anatomisch-pathologischen Untersuchung zu bewertende Parameter sind die Siriusrot-Färbung zur Beurteilung der Kollagenstruktur unter einer Polarisationslinse sowie die quantitative In-vitro-Untersuchung mit der ELISA-Methode zur Untersuchung von IL-10. Die Berechnung der Veränderungen im Verhältnis der Kollagenspiegel vom Typ 1 zu Typ 3 erfolgte durch Division des Kollagenverhältnisses vor der Behandlung durch das Kollagenverhältnis nach jeder Behandlung. Bei Betrachtung unter einer polarisierenden Linse erscheint Kollagen Typ 3 grün-doppelbrechend und Kollagen Typ 1 gelb-doppelbrechend. Das Kollagenverhältnis wurde durch Division der Zusammensetzung von Kollagen Typ 1 bis Kollagen Typ 3 in der Sirius-Rot-Färbung unter polarisierenden Linsen ermittelt.